操作步驟(僅供參考):
1.配制65mM H2O2基液:本試劑盒提供的H2O2基液中的H2O2濃度約為1M。由于過 氧化氫不是非常穩(wěn)定,使用前需自行測定過氧化氫的實(shí)際濃度。把濃度約為1M的H2O2基液用本試劑盒提供的CAT Assay buffer稀釋100倍,使H2O2基液中的H2O2濃度約為10mM。
2.準(zhǔn)備樣品:
a,細(xì)胞或組織樣品:取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行裂解,可以采用Leagene Western及IP 細(xì)胞裂解液,如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿,低速離心取上清,-70℃凍存,用于CAT的檢測。
b,血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備,用生理鹽水10倍稀釋后, 可以直接用于本試劑盒的測定,尿液通常也可以直接用于測定,-70℃凍存,用于CAT的檢測。
c,全血樣品:收集適量的全血(whole blood)至一抗凝管內(nèi),顛倒混勻。取100μl全 血凍融一次,用CAT Assay buffer1000倍后進(jìn)行CAT檢測。
d,血液中的紅細(xì)胞裂解液:用抗凝管收集血液,顛倒混勻。取至少500μl全血4℃ 3000g離心5min,棄上清,沉淀用預(yù)冷的生理鹽水洗滌3次。
e,高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀釋。
f,(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,以便于后續(xù) 計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的CAT含量。
3、 CAT檢測:按照下表設(shè)置空白管、自身對照管、測定管,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并 注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。樣品的檢測能設(shè)置平行孔。
4、分光光度計(jì)檢測405nm處吸光度,分光光度計(jì)比色杯光徑0.5cm。如果沒有分光光度計(jì),亦可用酶標(biāo)儀檢測,但如果有條件,盡量采用分光光度計(jì)檢測。蒸餾水調(diào)零,讀取各管吸光度值。一般應(yīng)數(shù)小時(shí)內(nèi)檢測完畢。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細(xì)閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱:海藻糖酶測試盒
規(guī)格:50T/24樣
測試方法:比色法
客戶自備儀器和試劑:
紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
特點(diǎn):
1、優(yōu)化設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方案,1小時(shí)即可完成
2、靈敏度高,操作便捷
3、試劑盒提供檢測果糖所需的全套試劑
常見樣本處理方法:
1、血清(漿)樣品:直接檢測。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g) :提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g組織,
加入 1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
樣品制備:
1). 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品,體積可達(dá)2.000ml。
2). 過濾混濁溶液。
3). 除去樣品中的CO 2 (果糖含量測試盒說明書過過濾)。
4 ). 果糖含量測試盒說明書過加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。
5 ). 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。
6 ). 用空白樣品做對照測定有色樣品(如有必要調(diào)整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。
8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。
10).含脂肪的樣品用熱水提取。
實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則:
1、洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
2、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。
3、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸。
4、檢測前,要打開酶標(biāo)儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。
5、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
6、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
7、溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
8、洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加徹底。沒有洗板機(jī)時(shí),倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
9、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
10、底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。
小鼠磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶pERK(Mouse phospho-extracellular signal-regulated kinase) ELISA Kit 96T
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多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白抗體英文名稱:MDR1 0.1ml
調(diào)節(jié)蛋白AIRE抗體英文名稱:AIRE 0.2ml 血管緊張素(ANG)ELISA試劑盒 ANG ELISA Kit
人星形膠質(zhì)細(xì)胞抗體英文名稱:Astrocyte 0.2ml 妊娠特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)ELISA試劑盒 SP1/PSβ1-G ELISA Kit
CD44V7抗體英文名稱:CD44v7 0.1ml 過氧化脂質(zhì)(LPO)ELISA試劑盒 LPO ELISA Kit
胞嘧啶脫氨酶抗體英文名稱:Cytosine deaminase 0.2ml E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒 E-Cad ELISA Kit
伴侶蛋白bc1同源復(fù)合體抗體英文名稱:CABC1 0.2ml 硒蛋白P(SEPP1)ELISA試劑盒 SEPP1 ELISA Kit
成纖維細(xì)胞生長因子受體1原癌基因伴侶蛋白抗體英文名稱:FGFR1OP 0.2ml 磷脂酶D4(PLD4)ELISA試劑盒 PLD4 ELISA Kit
磷酸化蛋白激酶GCN2蛋白抗體英文名稱:phospho-GCN2 (Thr667) 0.1ml 腈水解酶2(NIT2)ELISA試劑盒 NIT2 ELISA Kit
艾滋病病毒抗體英文名稱:HIV1 p55+p17 0.2ml 防御素β125(DEFβ125)ELISA試劑盒 DEFβ125 ELISA Kit
磷酸化胰島素受體β抗體英文名稱:Phospho-Insulin Receptor Beta (Tyr1355) 0.1ml S100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)ELISA試劑盒 S100A6 ELISA Kit
胞吐分泌蛋白Sec8抗體英文名稱:Sec8 0.2ml
磷酸化一氧化氮合成酶3(內(nèi)皮型)抗體英文名稱:Phospho-eNOS (Ser116) 0.1ml
蛋白酶體激活因子PA28γ抗體英文名稱:PSME3 0.2ml
嗅覺神經(jīng)相關(guān)蛋白STOML3抗體英文名稱:STOML3 0.2ml
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