ELISA 試驗時,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要**價廉、**、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
產(chǎn)品名稱:β-乳球蛋白試劑盒
產(chǎn)品貨號:BJ-100429
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品保存:2-8℃,有效期6個月
主要組成成分:試劑
性狀:液體
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T
96T指可以做94個標本,2個標準對照
48T指可以做47個標本,1個標準對照
96T-84個樣本
48T-42個樣本
待檢樣本:體液,血清,血漿,細胞培養(yǎng)上清液,尿液,組織勻漿,心房水標本等等。
本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。
樣品收集、處理及保存方法
1)血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內**的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3)細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
組成結構:
1、 血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內**的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測
試劑盒成分:
1 預包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T
2 酶標記抗體: (30倍濃縮)HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1
3 標準品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1
5 標記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1
6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1
7 終止液: 1N硫酸 12mL x 1
8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供) 酶標儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標準品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標記抗體和顯色劑)
羊抗人C3 (FITC標記)Anti-Human C3-FITC antibody produced i...Null1ML
N-羥基硫代琥珀酰亞胺N-Hydroxysulfosuccinimide Sodium (Sulf...106627-54-7250MG
羊抗人白蛋白 (FITC...Anti-Human Albumin-FITC produced in goatNull1ML
PyBroPBromotripyrrolidinophosphonium Hexaflu...132705-51-21G
六氟磷酸苯并三唑-1...PyBOP (≥97.0%)128625-52-51G
羊抗馬IgG (FITC標記)Anti-Horse IgG-FITC antibody produced ...Null1ML
兔抗豚鼠IgG (FITC...Anti-Guinea Pig IgG-FITC produced in r...Null1ML
HSTUHSTU265651-18-11G
兔抗羊IgG (FITC標記)Anti-Goat IgG-FITC antibody produced i...Null1ML
兔抗FITCAnti-FITC antibody produced in rabbitNull1ML
兔抗狗IgG (FITC標記)Anti-Dog IgG-FITC antibody produced in...Null1ML
羊抗雞IgG (FITC標記)Anti-Chicken IgG-FITC antibody produce...Null1ML
β-乳球蛋白試劑盒IL-16/LCF 白介素-16抗體 規(guī)格: 0.1ml
ADAMTS13 整合素樣金屬蛋白酶與凝酶13型抗體 規(guī)格: 0.2ml
ANKRD45/CT117 瘤/睪抗原117 規(guī)格: 0.2mlVAPA 囊泡相關膜蛋白相關蛋白A抗體 規(guī)格: 0.2ml
Dog IgM/Cy7 Cy7標記的兔抗犬IgM抗體 規(guī)格: 0.1mlDCBLD2 內皮細胞和平滑肌細胞衍生的神經(jīng)纖毛蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Kappa-casein/CSN3 κ-酪蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlBeta-lactoglobulin β-球蛋白抗體 規(guī)格: 1ml
Phospho-PRKACB(Thr198) 磷酸化蛋白激酶C亞性抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-chicken IgG/Cy3 Cy3標記的兔抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml
Goat anti-Mouse IgG whole serum 羊抗小鼠IgG抗清 規(guī)格: 1mlMSR1/CD204 巨噬細胞清道夫受體1/2/3抗體 規(guī)格: 0.2ml
TNFRSF14/HVEM 瘤壞死因子受體超家族成員14抗體 規(guī)格: 0.2mlBTG3 高表達神經(jīng)上皮蛋白BTG3抗體 規(guī)格: 0.2ml
KARS2/Lysyl tRNA synthetase 賴氨酸t(yī)RNA的連接酶抗體 規(guī)格: 0.2mlLCMT1 亮氨酸羧基甲基轉移酶1抗體 規(guī)格: 0.2ml
EphA4 酪氨酸蛋白激酶A4抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-Cdc25B (Ser149) 磷酸化細胞分裂周期蛋白25B抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-B-Raf (Ser602) 磷酸化B-Raf抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-mouse IgG-Fc/FITC FITC標記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.1mlRELN/Reelin 絡絲蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
HOXB8 同源盒蛋白B8抗體 規(guī)格: 0.2mlLMO2 T細胞易位蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-STAT1 (Ser727) 磷酸化信號轉導與轉錄激活因子1抗體 規(guī)格: 0.1mlFAM155A FAM155A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml