相對(duì)定量分析方法 :
2-ΔΔCt
前提:目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100%且偏差在5%以內(nèi)
1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值:
ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test)
ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator)
2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值:
ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
3、計(jì)算表達(dá)水平比率:
2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:PCR定量試劑盒
貨號(hào):BJ-205576
使用方法:
一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
具有下列特點(diǎn):
1.根據(jù) 指標(biāo)的保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個(gè)數(shù)量級(jí),可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
3.即開即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6.本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 μL、20
μL、200 μL、1000 μL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的**離心管、吸頭(10 μL、200 μL、1000 μL)、**雙蒸水。
酮咯酸氨丁三醇 Ketorolac Tromethamine 74103-07-4 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP,BR
酮咯酸氨丁三醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Ketorolac Tromethamine 74103-07-4 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
蘭索拉唑 Lansoprazole 103577-45-3 質(zhì)量規(guī)格:干品含量>98%,USP32
蘭索拉唑(標(biāo)準(zhǔn)品) Lansoprazole 103577-45-3 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
拉帕替尼 Lapatinib base 231277-92-2 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,可用于 培養(yǎng)
左炔諾孕酮 Levonorgestrel 797-63-7 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP33,可用于 培養(yǎng)
左炔諾孕酮(標(biāo)準(zhǔn)品) Levonorgestrel 797-63-7 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
舒必利(標(biāo)準(zhǔn)品) Levosulpiride 23672-07-3 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
舒必利 Levosulpiride 23672-07-3 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
L-甲狀腺素鈉;四碘代甲狀腺素鈉鹽,T4 Levothyroxine Sodium 25416-65-3 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR
利多卡因 Lidocaine 137-58-6 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%
利多卡因(標(biāo)準(zhǔn)品) Lidocaine 137-58-6 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
鹽酸利多卡因 Lidocaine HCl 6108-05-0 質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR
鹽酸利多卡因(標(biāo)準(zhǔn)品) Lidocaine HCl 6108-05-0 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
賴諾普利 Lisinopril Dihydrate 83915-83-7 質(zhì)量規(guī)格:>98%,二水合物可用于 培養(yǎng)
賴諾普利(標(biāo)準(zhǔn)品) Lisinopril Dihydrate 83915-83-7 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
鹽酸洛貝林 Lobeline Hydrochloride 134-63-4 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進(jìn)分
氯尼達(dá)明 Lonidamine 50264-69-2 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
洛匹那韋 Lopinavir 192725-17-0 質(zhì)量規(guī)格:>99%
洛匹那韋(標(biāo)準(zhǔn)品) Lopinavir 192725-17-0 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
氯雷他定 Loratadine 79794-75-5 質(zhì)量規(guī)格:>99%
氯雷他定(標(biāo)準(zhǔn)品) Loratadine 79794-75-5 質(zhì)量規(guī)格:>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
褪黑素,松果體素 Melatonine 73-31-4 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR膜電位依賴性純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)熒光測定試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
呼吸鏈依賴性純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)熒光測定試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
活體 線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20/400次
超氧化物陰離子比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織超氧化物陰離子比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
血液超氧化物陰離子比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
PCR定量試劑盒體液超氧化物陰離子比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
超氧化物陰離子化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織超氧化物陰離子化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
血液超氧化物陰離子化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
體液超氧化物陰離子化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
超氧化物陰離子熒光法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織超氧化物陰離子熒光法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
血液超氧化物陰離子熒光法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
體液超氧化物陰離子熒光法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
體內(nèi)(in vivo)超氧化物陰離子熒光法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
注意事項(xiàng):
1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織,若為長期冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測時(shí),切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 建議擴(kuò)增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。
?5. 為了您的**和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作