細(xì)胞傳代步驟： 
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

我司全程提供細(xì)胞生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應(yīng)用、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存細(xì)胞株說明書信息，我們專業(yè)您的細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)，讓您實(shí)驗(yàn)再無煩擾！

英文簡稱：NHRF細(xì)胞

產(chǎn)品名稱：正常腎成纖維細(xì)胞

貨號：BJ-01X10704

規(guī)格：腎；成纖維細(xì)胞

形態(tài)特性:DMEM

生長特性:貼壁

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 :

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

培養(yǎng)操作:

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

使用方法：

收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織完全被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

組織3－羥－3－甲戊二酰輔酶A（HMG－COA）還原酶活性直接比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

血液3－羥－3－甲戊二酰輔酶A（HMG－COA）還原酶活性直接比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

  3－羥－3－甲戊二酰輔酶A（HMG－COA）還原酶活性間接比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

組織3－羥－3－甲戊二酰輔酶A（HMG－COA）還原酶活性間接比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

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3－羥－3－甲戊二酰輔酶A（HMG－COA）還原酶待測樣品制備試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

通用型蘋果酸脫氫酶（MDH）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

  蘋果酸脫氫酶（MDH）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

組織蘋果酸脫氫酶（MDH）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

血液蘋果酸脫氫酶（MDH）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

  磷酸腺苷脫氨酶（AMPD）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

組織磷酸腺苷脫氨酶（AMPD）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

  β氨基己糖苷酶（β-hexosaminidase）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

正常腎成纖維細(xì)胞100g Tricine 干粉，電泳級  Tricine，EG Powder 常溫保存

5mg 熒光素標(biāo)記的生物素 FITC-Biotin -20℃保存

營養(yǎng)瓊脂（NA） Nutrient Agar 250g

品紅亞硫酸鈉瓊脂平板（9cm） Fuchsin Basic Sodium Sulfide Agar 10個/包

2 ug pBiFC-bFosVC155 pBiFC-bFosVC155 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

100mL Bicine Buffer，0.5M,pH9.0   Bicine Buffer，0.5M,pH9.0   常溫保存

20次 DNA磷酸化試劑盒 DNA Phosphorylation Kit -20℃保存

2 ug pCMV-SPORT6 PEX5 pCMV-SPORT6 PEX5 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

1 g HDAC抑制劑 Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

Skirrow瓊脂 用于空腸彎曲的選擇分離培養(yǎng)(GB、ISO)，每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基需添加2支配套試劑。(SR0330) 250g

胰酪大豆胨瓊脂(TSA) 接觸皿 用于設(shè)備、車間、人員、包裝材料等表面微生物的測定。 55mm×10個/包

檢定培養(yǎng)基8號 用于去甲萬古霉等效價(jià)及殘留的微生物學(xué)檢定（中華人民共和國藥典2010版）。 100g

大豆酪蛋白消化物卵磷脂吐溫80瓊脂培養(yǎng)基（SCDCPA）  250g