操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
生化法檢測(cè)試劑盒:分光光度法、微量法、比色法、酶標(biāo)法、高液相色譜法,自主**,技術(shù)**團(tuán)隊(duì),操作簡便快捷,規(guī)格合理、系列成套,價(jià)格合理,是廣大科研工作者的好選擇。
產(chǎn)品名稱 |
測(cè)定方法 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
轉(zhuǎn)氫酶1生化試劑盒(微量法) |
微量法 |
100管/96樣 |
BJ-01611136-100管/96樣 |
商品介紹:
測(cè)定意義:TH位于線粒體的內(nèi)膜上,又稱為呼吸電子傳遞鏈復(fù)合體六,催化NADH+NADP+和 NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化。催化正向反應(yīng)稱為TH-1。線粒體NADH含量增加時(shí)會(huì)導(dǎo)致線粒體膜的H+電化學(xué)梯度升高,因而促進(jìn)了電子傳遞鏈上ROS的產(chǎn)生。TH-1促進(jìn)NADH轉(zhuǎn)換為NADPH,從而提高線粒體的抗氧化能力。測(cè)定原理:NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸(APADP+)替代NADP+,TH-1催化 APADP+還原**的APADPH在375nm有特征光吸收,因此通過測(cè)定375nm光吸收增加速率,來計(jì)算TH-1活性。需自備的儀器和用品:可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
儀器:
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀(比色測(cè)定波長為550nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、臺(tái)式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
特點(diǎn):
(1)應(yīng)用廣泛
由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測(cè)定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)靈敏度高
由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對(duì)元素測(cè)定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對(duì)于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致公認(rèn)是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。
(3)選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測(cè)定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測(cè)定,已有比較滿意的方法了。
(4)準(zhǔn)確度高
對(duì)于一般的分光光度法來說,其濃度測(cè)量的相對(duì)誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測(cè)量,則誤差往往可減少到千分之幾。
(5)適用濃度范圍廣
可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。
(6)分析成本低、操作簡便、快速
Total Superoxide Dismutase Assay Kit with WST-8 總SOD活性檢測(cè)試劑盒(WST-8法) 100次
核轉(zhuǎn)位分析試劑盒(單分子轉(zhuǎn)位)(FM法) 100T
SIS3 Smad3抑制劑(SIS3) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg
細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 50T
一氧化碳血紅蛋白檢測(cè)試劑盒(比色法) 50T
Hemoglobin test solution 血紅蛋白測(cè)試液(HICN比色法) 1ml/35樣
自噬檢測(cè)試劑盒(熒光顯微鏡,MDC法) 100T
顯影定影試劑盒 1盒
Aminophylline 非磷酸二酯酶抑制劑(Aminophylline) 1mL(10mM)|100mg|500mg
Pargyline hydrochloride MAO抑制劑(Pargyline hydrochloride) 1mL(10mM)|500mg
Mycro 3 c-Myc抑制劑(Mycro 3) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
AZM475271 Src激酶抑制劑(AZM475271) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
Icilin TRPM8離子通道激動(dòng)劑(Icilin) 1mL(10mM)|10mg|50mg
GW0742 高度PPARδ激動(dòng)劑(GW0742) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
轉(zhuǎn)氫酶1生化試劑盒(微量法)植物滲調(diào)蛋白(Osmotins)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒 氣管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL
大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒 氣管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL
犬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 髂動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL
人血管內(nèi)皮生長因子A(VEGF-A)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒 前列腺癌細(xì)胞英文名稱:22RV1
小鼠阿立新A(Orexin A)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 前列腺癌細(xì)胞英文名稱:DU 145
小鼠乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 前列腺癌細(xì)胞英文名稱:PC-3
大鼠肌球蛋白輕鏈磷酸酶(MLCP)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒 前列腺成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL
雞**球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒 前列腺成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL
人成骨生長肽(OGP)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 前列腺平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL
人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 前列腺上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL
人狂犬病毒抗原ELISA試劑盒96T/48T試劑盒 前列腺平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL