抗體保存注意事項(xiàng)
抗體保存注意事項(xiàng)
1、加入甘油:對于大多數(shù)抗體,可加入50%的甘油來避免反復(fù)凍融。甘油在-20℃可降低冰點(diǎn),但不建議加入甘油的抗體保存于-80℃,該溫度已經(jīng)超過了甘油的冰點(diǎn);
2、 加蛋白保護(hù)劑:蛋白在高濃度時(shí)不易降解,正如有些抗體會(huì)加入BSA作為穩(wěn)定劑的原因,同時(shí)加入蛋白也可減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會(huì)和抗體一起競爭結(jié)合標(biāo)記物。
3、加入疊氮化鈉:為了防止微生物污染,經(jīng)常選擇加入疊氮化鈉到抗體中(終濃度 0.02% (w/v))。但在下述情況中不能使用疊氮化鈉:
抗體用于染色或處理活細(xì)胞,用于體內(nèi)研究。疊氮化鈉在抵抗微生物的同時(shí),對其它大部分有機(jī)物也是有毒的,因?yàn)樗钄嗔司€粒體的 細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)cytochrome electron transportsystem。
要偶聯(lián)帶有氨基的抗體。疊氮化鈉會(huì)干擾任何含有氨基的偶聯(lián),因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前,應(yīng)將疊氮化鈉去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮化鈉保存,但是濃度只能是0.01%。對于需要偶聯(lián)的抗體,硫柳汞 (merthiolate)可以替代疊氮化鈉作為保護(hù)劑。
此外,如果需要去除疊氮化鈉,可以通過凝膠電泳或過濾的方式(IgG 的分子量是 150kDa,疊氮化鈉的分子量只有65Da),使用cut off 14kDa的濾膜即可將疊氮化鈉從抗體中去除。