新聞詳情
B15細胞傳代步驟介紹
日期：2024-11-23 00:42
瀏覽次數(shù)：137
摘要：
B15細胞（ 人Ph+急淋白血病細胞系）傳代：
1.用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶**，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；
2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進行傳代，傳代比例為1:3到1:6；
3.傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（一次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為佳消化時間，記錄佳消化時間，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之完全脫落，然后收集細胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入完全培養(yǎng)基重懸細胞，進行傳代。
1.用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶**，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；
2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進行傳代，傳代比例為1:3到1:6；
3.傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（一次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為佳消化時間，記錄佳消化時間，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之完全脫落，然后收集細胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入完全培養(yǎng)基重懸細胞，進行傳代。