一、 實(shí)驗(yàn)原理：

細(xì)胞遷移即細(xì)胞劃痕法，是測定細(xì)胞遷移運(yùn)動與修復(fù)能力的方法，類似體外傷口痊愈模型。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其他硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間，取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞是否生長至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞的生長遷移能力，實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素、外源性基因等組別，通過不同分組之間的細(xì)胞對于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時(shí)，在融合的單層細(xì)胞上人為**一個(gè)空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細(xì)胞會逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”痊愈。

二、 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

倒置熒光顯微鏡 (Olympus, IX71型)，細(xì)胞培養(yǎng)箱 (Thermo)

三、 實(shí)驗(yàn)方法

1、培養(yǎng)板接種細(xì)胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標(biāo)記（方便拍照時(shí)定位同一個(gè)視野）。

2、細(xì)胞消化后接入12孔板，數(shù)量以貼壁后鋪滿板底為宜（數(shù)量少時(shí)可培養(yǎng)一段時(shí)間至鋪滿板底）。

3、細(xì)胞鋪滿板底后，用1ml槍頭垂直于孔板**細(xì)胞劃痕，盡量保證各個(gè)劃痕寬度一致。（人工槍頭**劃痕難以保證劃痕寬度的一致性，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這也是該方法*大的缺陷）。

4、吸去細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS沖洗孔板三次，洗去劃痕產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。

5、加入無血清培養(yǎng)基，拍照記錄。

6、將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每隔4-6小時(shí)取出拍照。

7、根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。