下面簡(jiǎn)要說(shuō)明DNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟，以Entranster-H4000，DNA轉(zhuǎn)染試劑為例：

1.提前**細(xì)胞鋪板 提前**將細(xì)胞種植在24孔板中，以轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度在60％左右為宜。

2.轉(zhuǎn)染過(guò)程

⑴將0.8μg的DNA用25μl無(wú)血清稀釋液稀釋?zhuān)浞只靹?，制成DNA稀釋液。 注意：無(wú)血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無(wú)血清DMEM或1640。

⑵將2μl的EntransterTM-H4000用25μl無(wú)血清稀釋液體稀釋?zhuān)浞只靹颍瞥蒃ntransterTM-H4000稀釋液。室溫靜置5分鐘。

⑶將EntransterTM-H4000稀釋液分別加入到DNA稀釋液中，充分混勻（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上），室溫靜置15分鐘。轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成。

⑷將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入到含細(xì)胞和完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器上，輕柔混勻。 注意：①對(duì)本試劑，采用含血清的全培養(yǎng)基有助于提升轉(zhuǎn)染效率。②完全培養(yǎng)基可加抗生 su。

⑸培養(yǎng)4-6小時(shí)后更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時(shí)。 注意：①如細(xì)胞沒(méi)有毒性等不佳情況，轉(zhuǎn)染后4-6小時(shí)可不必更換培養(yǎng)基。

重要提示：

1.本品在轉(zhuǎn)染過(guò)程中可以添加抗生 su，抗生 su的添加與否不影響轉(zhuǎn)染效率和毒性。

2.如轉(zhuǎn)染后需要用Trizol提取RNA，建議轉(zhuǎn)染后6小時(shí)換液。