ELISA雙抗體夾心法操作過程
日期：2024-11-22 14:52
瀏覽次數(shù)：90
摘要：ELISA雙抗體夾心法操作過程
ELISA雙抗體夾心法以已知抗體(抗HBs)包被載體，然后將含有抗原的待檢標(biāo)本加入，共同孵育后，抗原結(jié)合于包被抗體上，再加入酶標(biāo)記特異抗體(酶標(biāo)抗HBs)，酶標(biāo)抗體連接到抗原上，*后加入底物溶液，根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量。
操作過程：
1、加入待測標(biāo)本每孔0.05ml，并設(shè)HBsAg陽性對照2孔，HBsAg陰性對照2孔，空白對照1孔，然后加入酶結(jié)合物每孔1滴(0.05ml、空白對照孔不加)，充分混勻后置37℃孵育30分鐘。
2、洗板:棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體、拍干、用洗滌液注滿每孔，棄去拍干，反復(fù)五次后拍干。
3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml)，然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml)，混勻，37℃孵育10分鐘。
4、每孔加終止液1滴(0.05ml)，混勻。
結(jié)果：
比色法:波長450nm，先用空白孔校零點，然后讀取各孔光密度值。
樣品OD值/陰性對照平均OD值≥ 2.1判斷為陽性，否則為陰性。
備注:陰性對照平均OD值低于0.05作0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。陽性對照OD值≥0.8，實驗結(jié)果有效。