分析流式與werstern細胞的區(qū)別
日期：2024-11-23 05:26
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摘要：
分析流式與werstern細胞的區(qū)別：
1、Western 是檢測蛋白表達的金標準，可用于檢測細胞多種類型的蛋白；流式細胞術(shù)的方法多用于檢測細胞膜蛋白，雖然也可通過Triton-X100給細胞打孔的方法來檢測胞內(nèi)蛋白，但對于分泌蛋白卻是無能為力的；
2、Western測蛋白含量對抗體的量需要很少，一般1：1000左右，而流式對抗體的需要量很大，一般1：50（很浪費抗體）；
3、采用Western方法檢測細胞蛋白含量的變化一般要有內(nèi)參，而流式一般要把每個樣品分為兩份，同時都做只加二抗（FITC標記的）的對照，這樣平均到每個細胞的...
分析流式與werstern細胞的區(qū)別：
1、Western 是檢測蛋白表達的金標準，可用于檢測細胞多種類型的蛋白；流式細胞術(shù)的方法多用于檢測細胞膜蛋白，雖然也可通過Triton-X100給細胞打孔的方法來檢測胞內(nèi)蛋白，但對于分泌蛋白卻是無能為力的；
2、Western測蛋白含量對抗體的量需要很少，一般1：1000左右，而流式對抗體的需要量很大，一般1：50（很浪費抗體）；
3、采用Western方法檢測細胞蛋白含量的變化一般要有內(nèi)參，而流式一般要把每個樣品分為兩份，同時都做只加二抗（FITC標記的）的對照，這樣平均到每個細胞的發(fā)光就不用內(nèi)參了；
4、就個人經(jīng)驗而言，流式用多抗不好，單抗標出來不錯。
不過流式的應用原理主要還是抗原和抗體反應和western、免yi組化沒有本質(zhì)差別，但是由于免yi組化和western都有酶催化底物的放大體系，因此，流式不適合檢測低表達的蛋白，低表達的還是采用western（尤其是化學發(fā)光底物更佳）和免yi組化更好。當然，流式*大的一個特點就是，可以定量（百分比），如果是高表達的用流式細胞儀非常有優(yōu)勢。