提高PCR特異性的四種策略
日期：2024-11-23 04:44
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摘要：
提高PCR特異性的四種策略:
1、巣式PCR（Nest-PCR）可增加稀有靶序列的靈敏度；降低了擴(kuò)增多個(gè)靶位點(diǎn)的可能性；提高PCR特異性
2、遞減PCR（Touch Down PCR）：前幾個(gè)循環(huán)使用嚴(yán)謹(jǐn)?shù)耐嘶饤l件提高特異性；循環(huán)設(shè)在比估算的Tm高大約5的退火溫度下開(kāi)始，然后每個(gè)循環(huán)降低1-2，直到退火溫度低于Tm 5 。適合用于AFLP、DNA指紋分析等。
3、熱啟動(dòng)PCR：抑制一種基本成分延遲DNA合成，直到PCR儀到達(dá)變性溫度。如在冰上配制...
提高PCR特異性的四種策略:
1、巣式PCR（Nest-PCR）可增加稀有靶序列的靈敏度；降低了擴(kuò)增多個(gè)靶位點(diǎn)的可能性；提高PCR特異性
2、遞減PCR（Touch Down PCR）：前幾個(gè)循環(huán)使用嚴(yán)謹(jǐn)?shù)耐嘶饤l件提高特異性；循環(huán)設(shè)在比估算的Tm高大約5的退火溫度下開(kāi)始，然后每個(gè)循環(huán)降低1-2，直到退火溫度低于Tm 5 。適合用于AFLP、DNA指紋分析等。
3、熱啟動(dòng)PCR：抑制一種基本成分延遲DNA合成，直到PCR儀到達(dá)變性溫度。如在冰上配制PCR反應(yīng)液以抑制Taq酶活性，后將其置于預(yù)熱的PCR儀中。
4、使用PCR增強(qiáng)劑：甲酰胺，DMSO，甘油，甜菜堿等可以降低熔解溫度，有助于引物退火，輔助DNA聚合酶延伸通過(guò)二級(jí)結(jié)構(gòu)區(qū)。但是增強(qiáng)劑的濃度要適當(dāng)。