穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
日期：2024-11-23 05:14
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摘要：
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選：
1、 轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生su 的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2、每隔3-4天更換含有藥wu 的篩選培養(yǎng)液。
3、篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
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穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選：
1、 轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生su 的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2、每隔3-4天更換含有藥wu 的篩選培養(yǎng)液。
3、篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
4、 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥wu 的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5、之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。