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產(chǎn)品名稱:鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)活性測(cè)定試劑盒
規(guī)格:詳見(jiàn)說(shuō)明
測(cè)試方法:詳見(jiàn)說(shuō)明
客戶自備儀器和試劑:
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
特點(diǎn):
1、優(yōu)化設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方案,1小時(shí)即可完成
2、靈敏度高,操作便捷
3、試劑盒提供檢測(cè)果糖所需的全套試劑
常見(jiàn)樣本處理方法:
1、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g) :提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g組織,
加入 1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
樣品制備:
1). 直接或稀釋使用清亮無(wú)色中性液體樣品,體積可達(dá)2.000ml。
2). 過(guò)濾混濁溶液。
3). 除去樣品中的CO 2 (果糖含量測(cè)試盒說(shuō)明書過(guò)過(guò)濾)。
4 ). 果糖含量測(cè)試盒說(shuō)明書過(guò)加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。
5 ). 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。
6 ). 用空白樣品做對(duì)照測(cè)定有色樣品(如有必要調(diào)整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。
8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。
10).含脂肪的樣品用熱水提取。
實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則:
1、洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
2、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。
3、底物有一定的毒性,終止液對(duì)皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸。
4、檢測(cè)前,要打開(kāi)酶標(biāo)儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。
5、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
6、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會(huì)自然流下去。
7、溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
8、洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加徹底。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí),倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
9、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
10、底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。
2,3',4,4'-四羥基二苯甲酮(>90.0%(GC)(T)) 2,3',4,4'-Tetrahydroxybenzophenone 61445-50-9 質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(GC)(T) 氨芐青霉素溶液 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10毫克/毫升
1,4-雙(4-氨苯氧基)苯(>98.0%(GC)(T)) 1,4-Bis(4-aminophenoxy)benzene 581437 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T) G418溶液 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10毫克/毫升
1,3-雙(4-羥基苯氧基)苯(>97.0%(GC)) 1,3-Bis(4-hydroxyphenoxy)benzene 126716-90-3 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC) 慶大霉素溶液 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10毫克/毫升
1,4-雙(3-羥基苯氧基)苯(>96.0%(GC)) 1,4-Bis(3-hydroxyphenoxy)benzene 5085-95-0 質(zhì)量規(guī)格:>96.0%(GC) 蛋白酶抑制劑混合液 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:保留細(xì)胞內(nèi)成分活性A、 動(dòng)物細(xì)胞B、 細(xì)C、 酵母D、 植物
2,2'-雙(羥甲基)二苯醚(>98.0%(GC)) 2,2'-Bis(hydroxymethyl)diphenyl Ether 10038-40-1 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 磷酸酶抑制劑混合液 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:抑制磷酸酶活性
雙(2-甲酰苯基)醚(>98.0%(GC)) Bis(2-formylphenyl) Ether 49590-51-4 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 蛋白酶/磷酸酶完全抑制混合液 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:抑制蛋白破壞性生物酶活性
1,3-雙(4-氨苯氧基)苯(>98.0%(GC)(T)) 1,3-Bis(4-aminophenoxy)benzene 2479-46-1 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T) 裂解液Ⅰ 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:制備活性化亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)
4-氨基-4'-氯二苯醚(>97.0%(GC)(T)) 4-Amino-4'-chlorodiphenyl Ether 101-79-1 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)(T) 裂解液Ⅱ 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:制備活性化細(xì)胞蛋白
4-氯-4'-羥基二苯醚(>95.0%(GC)) 4-Chloro-4'-hydroxydiphenyl Ether 21567-18-0 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC) 裂解液Ⅲ 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:各種活性化細(xì)胞制備處理
4,4'-二硝基二苯醚(>99.0%(GC)) 4,4'-Dinitrodiphenyl Ether 101-63-3 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC) 裂解液Ⅳ 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:不確保細(xì)胞內(nèi)活性的成分制備
3,4'-二氨基二苯醚(>97.0%(GC)(T)) 3,4'-Diaminodiphenyl Ether 2657-87-6 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)(T) 裂解液Ⅴ 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:紅細(xì)胞裂解液/白細(xì)胞分離
1,4-二苯氧基苯(>98.0%(GC)) 1,4-Diphenoxybenzene 3061-36-7 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 裂解液Ⅵ 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:線粒體裂解液
4,4'-二羧基二苯醚(>98.0%(GC)(T)) 4,4'-Dicarboxydiphenyl Ether 2215-89-6 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T) 裂解液Ⅶ-1 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:細(xì)裂解液
4,4'-二羥基二苯醚(>98.0%(GC)) 4,4'-Dihydroxydiphenyl Ether 23994 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 裂解液VII-2 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:葡萄球裂解液
鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)活性測(cè)定試劑盒豬組織因子(TF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豬組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豬組胺(HIS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豬總蛋白(TPS)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豬轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/SLAⅢ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/SLAⅡ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/SLAⅠ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豬中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豬脂聯(lián)素(ADP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豬脂蛋白α(Lp-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
操作步驟(僅供參考):
1.配制65mM H2O2基液:本試劑盒提供的H2O2基液中的H2O2濃度約為1M。由于過(guò) 氧化氫不是非常穩(wěn)定,使用前需自行測(cè)定過(guò)氧化氫的實(shí)際濃度。把濃度約為1M的H2O2基液用本試劑盒提供的CAT Assay buffer稀釋100倍,使H2O2基液中的H2O2濃度約為10mM。
2.準(zhǔn)備樣品:
a,細(xì)胞或組織樣品:取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行裂解,可以采用Leagene Western及IP 細(xì)胞裂解液,如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿,低速離心取上清,-70℃凍存,用于CAT的檢測(cè)。
b,血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備,用生理鹽水10倍稀釋后, 可以直接用于本試劑盒的測(cè)定,尿液通常也可以直接用于測(cè)定,-70℃凍存,用于CAT的檢測(cè)。
c,全血樣品:收集適量的全血(whole blood)至一抗凝管內(nèi),顛倒混勻。取100μl全 血凍融一次,用CAT Assay buffer1000倍后進(jìn)行CAT檢測(cè)。
d,血液中的紅細(xì)胞裂解液:用抗凝管收集血液,顛倒混勻。取至少500μl全血4℃ 3000g離心5min,棄上清,沉淀用預(yù)冷的生理鹽水洗滌3次。
e,高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀釋。
f,(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度,以便于后續(xù) 計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的CAT含量。
3、 CAT檢測(cè):按照下表設(shè)置空白管、自身對(duì)照管、測(cè)定管,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并 注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過(guò)高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。樣品的檢測(cè)能設(shè)置平行孔。
4、分光光度計(jì)檢測(cè)405nm處吸光度,分光光度計(jì)比色杯光徑0.5cm。如果沒(méi)有分光光度計(jì),亦可用酶標(biāo)儀檢測(cè),但如果有條件,盡量采用分光光度計(jì)檢測(cè)。蒸餾水調(diào)零,讀取各管吸光度值。一般應(yīng)數(shù)小時(shí)內(nèi)檢測(cè)完畢。