注：本公司提供試劑盒免費代測服務(wù)。需要其他檢測試劑盒請咨詢銷售人員。本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。

產(chǎn)品名稱：人Ⅳ型膠原蛋白ELISA檢測試劑盒
英文名稱：Collagen Type Ⅳ

檢測范圍：3ng/mL~96ng/mL

靈敏度：0.1

產(chǎn)品貨號：BJ-H63262
規(guī)格：48T/96T
主要成分：酶標板,試劑,標準品等。
試劑盒種屬：馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
檢測目的：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本..

組成：
48孔配制：
1.說明書: 1份
2. 封板膜:  2片（48）
3. 密封袋:  1個
4  酶標包被板: 1×48 (2-8℃保存)
5. 標準品:    0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標準品稀釋液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標試劑:     3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液： 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10 .顯色劑B液：  3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11 .終止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)
96孔配置：
1.  產(chǎn)品名稱說明書:1份
2.  封板膜:2片（96）
3.  密封袋: 1個
4.  酶標包被板:1×96 (2-8℃保存)
5.  標準品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6.  標準品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7.  酶標試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8.  樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9.  顯色劑A液：3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10. 顯色劑B液：3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11. 終止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度 
1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr； 
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min； 
3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%
乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×2min； 
4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫
度達到 98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×
2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見附 1）* 注：有些抗原勿需修復(fù)，
直接進入第 5 步封閉。 
5.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 30 min； 
6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗），37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜； 
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）； 
8.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 10 min； 
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑 D），37℃濕盒中孵育
30 min； 
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）； 
11.封閉： 滴加試劑 Tween 20，37℃濕盒孵育封閉 20 min； 
12.加 HRP-SA： 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E（1：50~200，終濃度 5~20 nM），37
℃濕盒中孵育 30 min； 
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）； 
14.顯色：應(yīng)用 DAB 溶液（試劑 F）顯色； 
15.復(fù)染：自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明； 
16.封片： 待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片； 
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。 

注意事項:
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間zui好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．  如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。
5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準
LAP3  亮氨酸氨基肽酶3抗體 規(guī)格: 0.2mlNDUFA9  NDUFA9蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Bone sialoprotein  骨涎蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlDGAT1/Diglyceride acyltransferase  二脂酰甘油?；D(zhuǎn)移酶抗體 規(guī)格: 0.2ml

Na+/K+-ATPase Alpha1  Na+/K+-ATPase α1 鈉鉀ATP酶α1多肽抗體 規(guī)格: 0.2mlFBXW12/FBXO35  FBXW12蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

SLY  2型豬鏈球溶素抗體 規(guī)格: 1mlC17orf78  17號染色體開放閱讀框78抗體 規(guī)格: 0.2ml

GNAO1/G0 Protein alpha   G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白O亞基A2抗體 規(guī)格: 0.2ml14-3-3 family protein  蘋果14-3-3蛋白抗體(植物) 1ml

Fibulin 1  “衰老關(guān)鍵蛋白”抗體 規(guī)格: 0.2mlROCK1  Rho相關(guān)蛋白激酶1抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-IGF1R(Tyr980)  磷酸化胰島素樣生因子1受體抗體 規(guī)格: 0.1mlTET2  甲基雙加氧酶TET2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Ephrin B3  酪氨酸蛋白激酶B3抗體 規(guī)格: 0.2mlAPM2  脂肪特定轉(zhuǎn)錄因子2抗體 規(guī)格: 0.2ml

ENPP1  核苷酸內(nèi)焦磷酸酶/磷酸二酯酶1抗體 規(guī)格: 0.2mlNFKBIA/IKB alpha  核因子κB抑制蛋白α抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-Dnmt1(Tyr399)  磷酸化DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1抗體 規(guī)格: 0.1mlcaspase-8 subunit p18  半胱氨酸蛋白酶8抗體 規(guī)格: 0.2ml

C11ORF67/PTD015  11號染色體開放閱讀框67抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-PTPN6(Tyr476)  磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-LIMK1(Thr508)/LIMK2(Thr505)  磷酸化單絲氨酸蛋白激酶1/2抗體 規(guī)格: 0.1ml

TMUB1  跨膜和泛素樣結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

OTUB  泛素特異性蛋白酶Otubain2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-PDPK1(Ser393)  磷酸化3磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體 規(guī)格: 0.1ml

人Ⅳ型膠原蛋白ELISA檢測試劑盒人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人Ⅰ型膠原吡啶交聯(lián)終肽（ICTP）ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人6酮前列腺素(6-K-PG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人6-羥多巴胺(6-OHDA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人5脂加氧酶(5-LO/LOX)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人5羥色胺轉(zhuǎn)運受體蛋白ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。 
（2）酶標板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。