操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
注:本公司提供試劑盒免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。需要其他檢測(cè)試劑盒請(qǐng)咨詢銷售人員。本公司產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品名稱:人糜蛋白酶ELISA檢測(cè)試劑盒
英文名稱:ATP5O
檢測(cè)范圍:3.125ng/mL~100ng/mL
靈敏度:0.1
產(chǎn)品貨號(hào):BJ-H68260
規(guī)格:48T/96T
主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動(dòng)植物。
檢測(cè)目的:用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本..
組成:
48孔配制:
1.說明書: 1份
2. 封板膜: 2片(48)
3. 密封袋: 1個(gè)
4 酶標(biāo)包被板: 1×48 (2-8℃保存)
5. 標(biāo)準(zhǔn)品: 0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標(biāo)試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10 .顯色劑B液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11 .終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存)
96孔配置:
1. 產(chǎn)品名稱說明書:1份
2. 封板膜:2片(96)
3. 密封袋: 1個(gè)
4. 酶標(biāo)包被板:1×96 (2-8℃保存)
5. 標(biāo)準(zhǔn)品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標(biāo)試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10. 顯色劑B液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11. 終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存
實(shí)驗(yàn)步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫
度達(dá)到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×
2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),
直接進(jìn)入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育
30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37
℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
注意事項(xiàng):
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間zui好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑B請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)
心鈉素Ⅰ,大鼠 Atriopeptin I (rat) 90817-13-3 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 添加劑琥珀酸比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
心鈉素Ⅱ,大鼠,小鼠,兔 Atriopeptin II (rat, rabbit,mouse) 88898-17-3 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 乳制品琥珀酸比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
心鈉素Ⅲ,大鼠 Atriopeptin III (rat) 90817-13-3 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 琥珀酸待測(cè)樣品處理試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
帶3蛋白質(zhì)(547-553),人 Band 3 Protein (547-553)(human) 167095-71-8 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 食物纖維素比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
帶3蛋白質(zhì)(824-829),人 Band 3 Protein (824-829)(human) 158475-15-1 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 通用型總淀粉生物酶比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
堿性成纖維生長因子 bFGF (119 - 126), BasicFibroblast Growth Factor,human, bovin 62031-54-3 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 食物總淀粉生物酶比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
大內(nèi)皮素-1(1-38),人 Big Endothelin-1 (1-38), human 120796-97-6 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 植物總淀粉生物酶比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
大內(nèi)皮素-1 (1-39),豬 Big Endothelin -1 (1-39),porcine 124834-83-9 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:
腦鈉素-32,大鼠 BNP-32, rat 133448-20-1 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 通用型總淀粉化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
鈴蟾肽 Bombesin 31362-50-2 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 食物總淀粉化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
緩激肽 Bradykinin 1490132 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 植物總淀粉化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
緩激肽(1-5) Bradykinin (1-5) 23815-89-6 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 酒類尿素比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
緩激肽(1-6) Bradykinin (1-6) 23815-88-5 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 飲料尿素比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
緩激肽(1-7) Bradykinin (1-7) 23815-87-4 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 乳制品尿素比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
人糜蛋白酶ELISA檢測(cè)試劑盒小鼠 SLC3A2 基因全長ORF克隆Defensin β1 防御素β1抗體規(guī)格: 0.1ml
小鼠 FXR1 基因全長ORF克隆RAB21 G蛋白家族RAB21蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
小鼠 TNFRSF9 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆Defensin β1 防御素β1抗體規(guī)格: 0.1ml
小鼠 IL3Ra 基因全長ORF克隆DEK DEK癌基因結(jié)合蛋白規(guī)格: 0.1ml
小鼠 CD151 基因全長ORF克隆Defensin β2/DEFB2/HBD-2 防御素β2抗體規(guī)格: 0.1ml
小鼠 TNFRSF4 基因全長ORF克隆Defensin β2 防御素β2抗體規(guī)格: 0.1ml
小鼠 IL1R1 基因全長ORF克隆DAP-5/p97 死亡相關(guān)蛋白5抗體規(guī)格: 0.1ml
小鼠 KLRB1A 基因全長ORF克隆DAPK1 凋亡相關(guān)蛋白激酶1抗體規(guī)格: 0.1ml
小鼠 CD160 基因全長ORF克隆DAPK2 凋亡相關(guān)蛋白激酶2抗體規(guī)格: 0.1ml
小鼠 PDCD1LG2 基因全長ORF克隆DAPK3/ZIP Kinase 凋亡相關(guān)蛋白激酶3抗體規(guī)格: 0.1ml
小鼠 USH1C 基因全長ORF克隆DCBLD2 內(nèi)皮 和平滑肌 衍生的神經(jīng)纖毛蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
小鼠 XIAP / BIRC4 基因全長ORF克隆ANKHD1 艾滋病病毒制約錨定蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
小鼠 PDGFB 基因全長ORF克隆Deltex-1 DTX1抗體規(guī)格: 0.2ml