操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
注:本公司提供試劑盒免費代測服務。需要其他檢測試劑盒請咨詢銷售人員。本公司產品僅用于科研實驗。
產品名稱:細胞凋亡抑制因子5試劑盒
產品貨號:BJ-99824
規(guī)格:48T/96T
主要成分:酶標板,試劑,標準品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本..
組成:
48孔配制:
1.說明書: 1份
2. 封板膜: 2片(48)
3. 密封袋: 1個
4 酶標包被板: 1×48 (2-8℃保存)
5. 標準品: 0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標準品稀釋液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10 .顯色劑B液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11 .終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存)
96孔配置:
1. 產品名稱說明書:1份
2. 封板膜:2片(96)
3. 密封袋: 1個
4. 酶標包被板:1×96 (2-8℃保存)
5. 標準品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標準品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10. 顯色劑B液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11. 終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫
度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×
2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,
直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育
30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37
℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間zui好控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準
4-乙酰氧基-3-甲氧...4-Acetoxy-3-methoxycinnamic acid (HPLC...2596-47-61G
4-氟苯基醋酸酯4-Fluorophenyl acetate,≥97.0%405-51-65G
四乙二醇二對甲苯磺...Tetraethylene Glycol Di-p-tosylate,97%37860-51-810G
溴代三(二甲基氨基)...Bromotris(dimethylamino)phosphonium He...50296-37-21G
1,1'-羰基二吡咯CDP,98%81759-25-31G
1,5-戊二醇1,5-Pentanediol,≥97.0%111-29-5100ML
1,2-二氫-2-異丁氧...1-Isobutoxycarbonyl-2-isobutoxy-1,2-di...38428-14-75G
硅膠Nano fumed silica,100-140目7631-86-9500G
(S)-(-)-α-氨基-γ...(S)-(-)-3-Aminotetrahydrofuran-2-One H...104162250MG
雌馬酚Equol,98%531-95-3250MG
對乙烯基愈瘡木酚2-Methoxy-4-vinylphenol,≥98%7786-61-05G
美替拉酮Metyrapone,96%54-36-41G
細胞凋亡抑制因子5試劑盒雄結合蛋白 48T/96T ABP Androgen Binding Protein
激活素A 48T/96T Activin A Activin A
促腎上腺皮質 48T/96T ACTH Adrenocor Ticotropic Hormore
乙酰膽堿 48T/96T ACH Acetylcholine
腎上腺素 48T/96T ADR Adrenaline
雄 48T/96T ADG Androgen
脂聯(lián)素 48T/96T APN/ADP Adiponectin
載脂蛋白 48T/96T AI Apolipoprotein
脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白 48T/96T a FABP Adipocyte Fatty Acid Binding Protein
抗Livin 抗體 48T/96T ALA Antilivin antibody
Alzheimer相關神經絲蛋白 48T/96T ALA.NTP Alzheimer-associated neuronal thread protein
甲胎蛋白異質體L3 48T/96T AFP.L3 Alpha fetoprotein L3 Fucosyltransferases