操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿(mǎn)板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿(mǎn)板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
注:本公司提供試劑盒免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。需要其他檢測(cè)試劑盒請(qǐng)咨詢(xún)銷(xiāo)售人員。本公司產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品名稱(chēng):白介素1α試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):BJ-100406
規(guī)格:48T/96T
主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚(yú)、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動(dòng)植物。
檢測(cè)目的:用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本..
組成:
1.說(shuō)明書(shū): 1份
2. 封板膜: 2片(48)
3. 密封袋: 1個(gè)
4 酶標(biāo)包被板: 1×48 (2-8℃保存)
5. 標(biāo)準(zhǔn)品: 0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標(biāo)試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10 .顯色劑B液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11 .終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存)
96孔配置:
1. 產(chǎn)品名稱(chēng)說(shuō)明書(shū):1份
2. 封板膜:2片(96)
3. 密封袋: 1個(gè)
4. 酶標(biāo)包被板:1×96 (2-8℃保存)
5. 標(biāo)準(zhǔn)品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標(biāo)試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10. 顯色劑B液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11. 終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存
實(shí)驗(yàn)步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無(wú)水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來(lái)水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫
度達(dá)到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來(lái)水沖洗,ddH2O 洗 2×
2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見(jiàn)附 1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),
直接進(jìn)入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過(guò)夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育
30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37
℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復(fù)染:自來(lái)水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
注意事項(xiàng):
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間zui好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑B請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)
水仙苷Narcissoside (≥98%,HPLC)604-80-820MG
二乙二醇乙醚Diethylene glycol monoethyl ether (99%)111-90-0500ML
乙酸丙酯Propyl acetate,≥99.5%109-60-4250ML
辛酸Octanoic acid (≥99%)124-07-210ML
辛酸亞錫Stannous octoate,≥95.0%301-10-0100G
正癸烷Decane,≥95.0%124-18-5100ML
癸酸Decanoic acid (≥98.0%)334-48-5100G
十二烷酸Dodecanoic acid (≥99%,GC)143-07-7100G
N-乙基馬來(lái)酰亞胺N-Ethylmaleimide (≥98%,HPLC)128-53-01G
3-巰基丙酸3-Mercaptopropionic acid,≥99%107-96-025G
二氯乙烷Ethylene dichloride (≥99.0%,ACS)107-06-2250ML
芍藥內(nèi)酯苷Alibiflorin (≥98%,HPLC)39011-90-020MG
白介素1α試劑盒Shigella tropina 志賀氏體蛋白抗體 規(guī)格: 1mlElongin B/TCEB2 轉(zhuǎn)錄延伸因子B2抗體 規(guī)格: 0.1ml
YAP1 原基因Yes相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlFibrinogen gamma chain 人纖維蛋白原γ鏈抗體 規(guī)格: 0.2ml
PCDHGA1 原鈣粘蛋白γA1抗體 規(guī)格: 0.2mlIFITM1/CD225 干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1抗體 0.1ml
Goat Anti-human IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的羊抗人IgG 規(guī)格: 0.1mlMRP8+MRP14 多藥耐藥相關(guān)蛋白8/9/14抗體 規(guī)格: 0.2ml
VGLL2 轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlCD43/SPN CD43抗體 規(guī)格: 0.1ml
KLK9 激肽釋放酶9抗體(舒管素9) 規(guī)格: 0.1mlPER1 protein 節(jié)律抑制蛋白PER1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-Rad17 (Ser645) 磷酸化細(xì)胞周期檢控Rad17蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlZW10 peptide 著絲粒蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
ZNF364/BCA2/RNF115 相關(guān)基因2抗體(鋅指蛋白364) 規(guī)格: 0.2mlp53 DINP1 p53誘導(dǎo)核蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
IFNA10/Interferon alpha10/Interferon alpha C 干擾素α10抗體 規(guī)格: 0.2mlCecropin 殺肽/天蠶抗肽抗體 規(guī)格: 0.2ml
IDI1 異戊烯焦磷酸1抗體 規(guī)格: 0.2mlTSPAN9/NET-5 四分子交聯(lián)體9/四旋蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
HEPACAM 肝細(xì)胞粘附分子抗體 規(guī)格: 0.2mlP73 protein P73瘤抑制基因抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Monkey IgG/APC APC標(biāo)記的兔抗猴IgG 規(guī)格: 0.1mlMMP-2 基質(zhì)金屬蛋白酶-2抗體 規(guī)格: 0.1ml
ENAH/MENA ENAH蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlPERP/p53 apoptosis effector related to PMP22 p53凋亡相關(guān)作用蛋白PMP22抗體 規(guī)格: 0.1ml
Tyk2 非受體酪氨酸蛋白激酶2抗體 規(guī)格: 0.2mlTenascin C (C terminal) 細(xì)胞粘合素抗體(C端)腱糖蛋白-C(固生蛋白)抗體 規(guī)格: 0.1ml