操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
注:本公司提供試劑盒免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。需要其他檢測(cè)試劑盒請(qǐng)咨詢銷售人員。本公司產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品名稱:白介素12受體β2試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):BJ-100412
規(guī)格:48T/96T
主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動(dòng)植物。
檢測(cè)目的:用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本..
組成:
1.說(shuō)明書: 1份
2. 封板膜: 2片(48)
3. 密封袋: 1個(gè)
4 酶標(biāo)包被板: 1×48 (2-8℃保存)
5. 標(biāo)準(zhǔn)品: 0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標(biāo)試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10 .顯色劑B液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11 .終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存)
96孔配置:
1. 產(chǎn)品名稱說(shuō)明書:1份
2. 封板膜:2片(96)
3. 密封袋: 1個(gè)
4. 酶標(biāo)包被板:1×96 (2-8℃保存)
5. 標(biāo)準(zhǔn)品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標(biāo)試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10. 顯色劑B液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11. 終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存
實(shí)驗(yàn)步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無(wú)水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來(lái)水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說(shuō)明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫
度達(dá)到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來(lái)水沖洗,ddH2O 洗 2×
2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見(jiàn)附 1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),
直接進(jìn)入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過(guò)夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育
30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37
℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復(fù)染:自來(lái)水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
注意事項(xiàng):
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間zui好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑B請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 如與英文說(shuō)明書有異,以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)
3-氨基吡啶3-Aminopyridine (≥99.0%)462-08-825G
2-氨基吡啶2-Aminopyridine (≥99%)504-29-025G
渥曼青霉素Wortmannin (≥98%, HPLC and TLC)19545-26-71MG
普流尼克 F-68Pluronic F-682594628100G
L-去甲腎上腺素(-)-Norepinephrine (≥98%, crystalline)51-41-2500MG
石斛堿Dendrobine (≥98%,HPLC)2115-91-520MG
多巴胺鹽酸鹽Dopamine hydrochloride (≥98.0%)62-31-75G
雷公藤內(nèi)酯酮Triptonide (≥98%,HPLC)38647-11-920MG
異阿魏酸3-Hydroxy-4-methoxycinnamic acid (≥98...537-73-520MG
豆甾醇Stigmasterol (≥98%,HPLC)83-48-720MG
瓊脂糖凝膠 Sepharo...Sepharose CL-6B62610-50-8250ML
瓊脂糖凝膠 Sepharo...Sepharose CL-4B61970-08-9250ML
白介素12受體β2試劑盒METTL11A 甲基化樣蛋白11抗體(N端) 規(guī)格: 0.1mlDuck salmonella 鴨沙門氏抗體 0.2ml
Rabbit Anti-chicken IgM/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗雞IgM 規(guī)格: 0.1mlCD5 CD5抗體 規(guī)格: 0.1ml
KCNC4/KV3.4 離子通道蛋白Kv3.4抗體 規(guī)格: 0.2mlCWH43 細(xì)胞壁合成蛋白43抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-Alpha synuclein(Tyr133) 磷酸化核突觸蛋白α抗體 規(guī)格: 0.1mlCK II Alpha/STK 絲/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶抗體Casein kinase Ⅱα(CKⅡα) 規(guī)格: 0.1ml
HIPK3 Fas相互作用蛋白激酶3抗體 規(guī)格: 0.2mlIRS-3 胰島素受體底物-3抗體 規(guī)格: 0.2ml
HRH1 組胺受體H1抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-FADD(Ser191) 磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
GRB10 生因子受體結(jié)合蛋白10抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Guinea pig IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.3ml
GAPDH 3-磷酸甘油醛脫酶抗體(內(nèi)參抗體) 0.1mlPhospho-PDGFRA(Tyr849)/PDGFRB(Tyr857) 磷酸化小板源性生因子受體α/β抗體 規(guī)格: 0.1ml
pan methyl Lysine 泛甲基賴氨酸抗體 規(guī)格: 0.2mlAurora C 有絲分裂激酶B抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗人IgM 規(guī)格: 0.1mlphospho-c-kit(Tyr936) 磷酸化原基因c-kit抗體 規(guī)格: 0.1ml
C10orf47 10號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框47抗體 規(guī)格: 0.2mlOSMR/OSMRB 抑瘤素M受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
IFN-β 干擾素β抗體 規(guī)格: 0.1mlHDAC10 組蛋白去乙酰化酶10抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-IRS1(Tyr1222) 磷酸化胰島素受體底物-1抗體 規(guī)格: 0.1mlSCDGFB/PDGF-D 小板源性生因子D(脊髓源性生因子B) 規(guī)格: 0.2ml
RIP5/RIPK5 受體結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶5抗體 規(guī)格: 0.2mlCrkRS/CRK7 細(xì)胞分裂周期2相關(guān)蛋白激酶7抗體 規(guī)格: 0.2ml