操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
注:本公司提供試劑盒免費代測服務。需要其他檢測試劑盒請咨詢銷售人員。本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。
產(chǎn)品名稱:γ干擾素試劑盒
產(chǎn)品貨號:BJ-100424
規(guī)格:48T/96T
主要成分:酶標板,試劑,標準品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本..
組成:
1.說明書: 1份
2. 封板膜: 2片(48)
3. 密封袋: 1個
4 酶標包被板: 1×48 (2-8℃保存)
5. 標準品: 0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標準品稀釋液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10 .顯色劑B液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11 .終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存)
96孔配置:
1. 產(chǎn)品名稱說明書:1份
2. 封板膜:2片(96)
3. 密封袋: 1個
4. 酶標包被板:1×96 (2-8℃保存)
5. 標準品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標準品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10. 顯色劑B液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11. 終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫
度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×
2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,
直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育
30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37
℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間zui好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準
1,8-二氮雙環(huán)[5.4.0...1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene (≥...6674-22-225ML
硫酸軟骨素 BChondroitin sulfate B sodium (from por...54328-33-525MG
橄欖油Olive oil (highly refined, low acidity)8001-25-0100ML
硬脂酸 (常規(guī))Stearic Acid (≥95%)21128250G
硬脂酸 (超純級)Stearic Acid (≥98.5%)211285G
氯化汞Mercury(II) chloride (99.999% trace me...7487-94-75G
TCTUTCTU (98%)330641-16-25G
PyAOPPyAOP156311-83-01G
羊抗馬IgG (HRP標記)Anti-Horse IgG-HRP antibody produced i...Null0.2ML
吐溫 40TWEEN 409005-66-7100ML
兔抗豚鼠IgG (HRP標...Anti-Guinea Pig IgG-HRP antibody produ...Null0.2ML
吐溫 65TWEEN 659005-71-4250G
γ干擾素試劑盒GERP/TRIM8/RNF27 環(huán)指蛋白27抗體 規(guī)格: 0.2mlClassical swine fever virus, CSFV 豬瘟病毒抗體 規(guī)格: 0.2ml
PID1 磷酸相互作用結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlAngiotensin III 管緊張素III抗體 規(guī)格: 0.2ml
Defensin β1 防御素β1抗體 規(guī)格: 0.1mlDC-SIGNR/CD299 CD299抗體 規(guī)格: 0.2ml
CDK5RAP3 周期素依賴性激酶5激活結(jié)合蛋白C53抗體 規(guī)格: 0.2mlHSP47 熱休克蛋白-47抗體 規(guī)格: 0.1ml
C12ORF63 12號染色體開放閱讀框63抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-INPPL1(Tyr1135) 肌醇聚磷酸鹽磷酸酶樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
STAU2 雙鏈RNA結(jié)合蛋白Staufen2抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-PP2A alpha/beta(Tyr119) 磷酸化蛋酸酶2A(PP2Aα)抗體 規(guī)格: 0.1ml
ZNF268 鋅指脂蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlUBE2D1 泛素蛋白連接酶D1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-human IgG 兔抗人IgG 規(guī)格: 1mgCYP1A1 細胞色素P450 1A1抗體 規(guī)格: 0.1ml
C6orf150 6號染色體開放閱讀框150抗體 規(guī)格: 0.2mlCOMP/EPD1/THBS5 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
PI 3 Kinase p85 beta 磷脂酰肌醇激酶p85β抗體 規(guī)格: 0.1mlGSTA3 谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶A3抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-CPI17 alpha (Thr38) 磷酸化蛋酸激酶PKC/CPI-17抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Biotin 兔抗生物素抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml
Dysferlin Dysferlin蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-p40phox (Thr154) 磷酸化嗜中性粒細胞胞漿因子4抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-RPA32/RPA2(Thr21) 磷酸化復制因子A蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml