ELISA 試驗(yàn)時(shí),注意事項(xiàng)如下:
1. 正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要**價(jià)廉、**、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
產(chǎn)品名稱:β酪蛋白試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):BJ-100435
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品保存:2-8℃,有效期6個(gè)月
主要組成成分:試劑
性狀:液體
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T
96T指可以做94個(gè)標(biāo)本,2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照
48T指可以做47個(gè)標(biāo)本,1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照
96T-84個(gè)樣本
48T-42個(gè)樣本
待檢樣本:體液,血清,血漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液,尿液,組織勻漿,心房水標(biāo)本等等。
本公司產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。
樣品收集、處理及保存方法
1)血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)**的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3)細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
組成結(jié)構(gòu):
1、 血清:操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)**的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細(xì)胞上清中白介素-6的定量檢測
試劑盒成分:
1 預(yù)包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T
2 酶標(biāo)記抗體: (30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1
3 標(biāo)準(zhǔn)品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1
5 標(biāo)記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1
6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1
7 終止液: 1N硫酸 12mL x 1
8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實(shí)驗(yàn)所需器材(但試劑盒沒有提供) 酶標(biāo)儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標(biāo)紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標(biāo)記抗體和顯色劑)
兔抗人白蛋白 (抗血...Anti-Human Albumin antibody produced i...Null1ML
羊抗人白蛋白 (抗血...Anti-Human Albumin antibody produced i...Null1ML
兔抗馬IgG (抗血清)Anti-Horse IgG antibody produced in ra...Null1ML
羊抗馬IgG (抗血清)Anti-Horse IgG antibody produced in goatNull1ML
兔抗豚鼠IgG (抗血清)Anti-Guinea Pig IgG antibody produced ...Null1ML
兔抗羊IgG (抗血清)Anti-Goat IgG antibody produced in rab...Null1ML
驢抗羊IgG (抗血清)Anti-Goat IgG antibody produced in don...Null1ML
兔抗狗IgG (抗血清)Anti-Dog IgG antibody produced in rabbitNull1ML
羊抗狗IgG (抗血清)Anti-Dog IgG antibody produced in goatNull1ML
兔抗地高辛 (抗血清)Anti-Digoxin antibody produced in rabbitNull1ML
兔抗雞IgG (抗血清)Anti-Chicken IgG antibody produced in ...Null1ML
羊抗雞IgG (抗血清)Anti-Chicken IgG antibody produced in ...Null1ML
β酪蛋白試劑盒C10orf88 10號(hào)染色體開放閱讀框88抗體 規(guī)格: 0.2mlHE4 附睪分泌蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml
TFF3 三葉肽因子3抗體 規(guī)格: 0.1mlLASS3 壽相關(guān)基因lASS3抗體 規(guī)格: 0.2ml
VAV1 鳥苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Mouse IgM/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml
EGFL8 表皮生因子樣蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2mlMAP3K14/NFkB Inducing Kinase NIK 絲裂原活化蛋白激酶3K14抗體 規(guī)格: 0.2ml
SMURF1 Smad蛋白E3泛素連接酶1抗體 規(guī)格: 0.2mlPSD93 突觸后密度蛋白93抗體 規(guī)格: 0.2ml
GFP 綠色熒光蛋白(組化用抗體) 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-human sIgA/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 規(guī)格: 0.5ml
SMOC2 分泌模塊化鈣結(jié)合蛋白2抗體(平滑肌相關(guān)蛋白2) 規(guī)格: 0.2mlLAG-3/CD223 細(xì)胞活化基因-3抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-ANTXR1(Tyr382) 磷酸化瘤管內(nèi)皮標(biāo)志物8抗體 規(guī)格: 0.1mlCNTD 細(xì)胞周期蛋白N端結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-NMDAR2B (Tyr1336) 磷酸化谷氨酸受體2B抗體 規(guī)格: 0.1mlRhoA RhoA抗體 規(guī)格: 0.1ml
CCDC18 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白18抗體 規(guī)格: 0.2mlPLTP 磷脂轉(zhuǎn)移蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
DAAM1 形態(tài)發(fā)生紊亂關(guān)聯(lián)激活因子1抗體 規(guī)格: 0.1mlKappa Light Chain k輕鏈抗體 規(guī)格: 0.1ml
hemagglutinin protein/H 麻疹病毒凝素抗體 0.2mlphospho-RPS6KA1(Thr359) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
DNA Ligase 1 DNA連接酶1抗體 規(guī)格: 0.1mlMrpL28 線粒體核糖體蛋白L28抗體 規(guī)格: 0.1ml
GP65/SDFR1/NPTN 間質(zhì)細(xì)胞衍化因子受體1抗體 規(guī)格: 0.1mlUSP3 去泛素化酶3抗體 0.2ml