相對定量分析方法 :
2-ΔΔCt
前提:目標序列和內參序列的擴增效率接近100%且偏差在5%以內
1、用內參基因的CT值歸一目標基因的CT值:
ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test)
ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator)
2、用校準樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值:
ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
3、計算表達水平比率:
2 –ΔΔCT=表達量的比值
參數規(guī)格:
產品名稱:PCR定量試劑盒
貨號:BJ-205576
使用方法:
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
具有下列特點:
1.根據 指標的保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個數量級,可以達到幾百拷貝/反應。
3.即開即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡單,定量準確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6.本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調移液器(2 μL、20
μL、200 μL、1000 μL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的**離心管、吸頭(10 μL、200 μL、1000 μL)、**雙蒸水。
酮咯酸氨丁三醇 Ketorolac Tromethamine 74103-07-4 質量規(guī)格:>98.5%,USP,BR
酮咯酸氨丁三醇(標準品) Ketorolac Tromethamine 74103-07-4 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
蘭索拉唑 Lansoprazole 103577-45-3 質量規(guī)格:干品含量>98%,USP32
蘭索拉唑(標準品) Lansoprazole 103577-45-3 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
拉帕替尼 Lapatinib base 231277-92-2 質量規(guī)格:>98.5%,可用于 培養(yǎng)
左炔諾孕酮 Levonorgestrel 797-63-7 質量規(guī)格:>98%,USP33,可用于 培養(yǎng)
左炔諾孕酮(標準品) Levonorgestrel 797-63-7 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
舒必利(標準品) Levosulpiride 23672-07-3 質量規(guī)格:>98%,標準品
舒必利 Levosulpiride 23672-07-3 質量規(guī)格:>98%,BR
L-甲狀腺素鈉;四碘代甲狀腺素鈉鹽,T4 Levothyroxine Sodium 25416-65-3 質量規(guī)格:>98.5%,BR
利多卡因 Lidocaine 137-58-6 質量規(guī)格:>98.5%
利多卡因(標準品) Lidocaine 137-58-6 質量規(guī)格:含量測定
鹽酸利多卡因 Lidocaine HCl 6108-05-0 質量規(guī)格:>99%,AR
鹽酸利多卡因(標準品) Lidocaine HCl 6108-05-0 質量規(guī)格:含量測定
賴諾普利 Lisinopril Dihydrate 83915-83-7 質量規(guī)格:>98%,二水合物可用于 培養(yǎng)
賴諾普利(標準品) Lisinopril Dihydrate 83915-83-7 質量規(guī)格:含量測定
鹽酸洛貝林 Lobeline Hydrochloride 134-63-4 質量規(guī)格:>98%,進分
氯尼達明 Lonidamine 50264-69-2 質量規(guī)格:>99%,BR
洛匹那韋 Lopinavir 192725-17-0 質量規(guī)格:>99%
洛匹那韋(標準品) Lopinavir 192725-17-0 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
氯雷他定 Loratadine 79794-75-5 質量規(guī)格:>99%
氯雷他定(標準品) Loratadine 79794-75-5 質量規(guī)格:>99%,標準品
褪黑素,松果體素 Melatonine 73-31-4 質量規(guī)格:>99%,BR膜電位依賴性純化線粒體氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
呼吸鏈依賴性純化線粒體氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
活體 線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20/400次
超氧化物陰離子比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
組織超氧化物陰離子比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
血液超氧化物陰離子比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
PCR定量試劑盒體液超氧化物陰離子比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
超氧化物陰離子化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
組織超氧化物陰離子化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
血液超氧化物陰離子化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
體液超氧化物陰離子化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
超氧化物陰離子熒光法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
組織超氧化物陰離子熒光法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
血液超氧化物陰離子熒光法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
體液超氧化物陰離子熒光法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
體內(in vivo)超氧化物陰離子熒光法定量檢測試劑盒 進口/國產 規(guī)格:20次
注意事項:
1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。
4. 建議擴增片段長度1 kb以內,以便擴增效率佳。
?5. 為了您的**和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作