訂購信息：
英文簡稱：Duckembryo細(xì)胞
產(chǎn)品名稱：鴨子胚胎成纖維細(xì)胞；Duckembryo
貨號：BJ-01X8525
規(guī)格：T25
形態(tài)特性:成纖維母細(xì)胞樣
生長特性:貼壁生長
特征特性:
培養(yǎng)條件:FM培養(yǎng)基
傳代方法:1：2傳代
【培養(yǎng)指南】
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
【細(xì)胞凍存】
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行293/HEK-293細(xì)胞|細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走)，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
【復(fù)蘇的原則】
快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害。復(fù)旦細(xì)胞庫各地均可發(fā)貨，統(tǒng)一價格，本公司出售的所有細(xì)胞僅供科研使用。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
rhIL-18 重組人白 介素18抗體規(guī)格: 0.1ml
Adiponectin receptor 2 脂聯(lián)素受體2抗體規(guī)格: 0.1ml
ELAVL3/HuC 副腫瘤綜合癥小腦變性相關(guān)蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
Adiponectin 脂聯(lián)素抗體規(guī)格: 0.1ml
APH1a 早老素γ分泌酶抗體規(guī)格: 0.2ml
Acrosin 精子頂體前體蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
SNX25 分揀微管連接蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
ADM/AM/Adrenomedullin 腎上腺髓質(zhì)素抗體規(guī)格: 0.1ml
ADM (ProAM-N20) 腎上腺髓質(zhì)素抗體(N端20肽)規(guī)格: 0.1ml
ADM R 腎上腺髓質(zhì)素受體抗體規(guī)格: 0.1ml
C CBL 原癌基因CBL2抗體規(guī)格: 0.2ml
5HT3C/5HT3E 5-羥色胺受體3C抗體規(guī)格: 0.1ml
phospho-C CBL(Tyr674) 磷酸化原癌基因CBL2抗體規(guī)格: 0.1ml
鴨子胚胎成纖維細(xì)胞；Duckembryo1 管 Rosettalblue(DE3)大腸桿 RosettalBlue(DE3) E.coli Strain -80℃保存
50T 腦膜炎病毒多重PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
1瓶 CCC-HPE-2 株 CCC-HPE-2 低溫運輸和保存
千金藤素 Cepharanthine 481-49-2 20mg
2 ug pCMV/Myc/Nuc/GFP pCMV/Myc/Nuc/GFP 低溫運輸，-20℃保存
血平板 (成品培養(yǎng)基) 用于營養(yǎng)要求較高的細(xì)的培養(yǎng)及溶血試驗 20個/盒
葡萄糖發(fā)酵管(軍團) 20支
甘露醇卵黃多粘素瓊脂平板 用于蠟樣芽孢桿的分離培養(yǎng)及數(shù)測定。 90mmX20個
2500mL Tricine Buffered Saline,5X,pH8.0 Tricine Buffered Saline,5X,pH8.0 常溫保存
雙岐桿生化試驗無糖對照 20支
10mL RNase-free 水 RNase-free Water 常溫
500mL Zymogram Developing Buffer,10X Zymogram Developing Buffer,10X 常溫保存
1g 纖維素酶 Cellulase From Aspergillus Niger 4℃保存
原代細(xì)胞分離：
一、細(xì)胞培養(yǎng)
1取材 在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細(xì)胞（視實驗?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。2培養(yǎng) 將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。3凍存及復(fù)蘇（可參閱后面有關(guān)章節(jié)）為了保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，保存于液氮中。在極低的溫度下，細(xì)胞保存的時間幾乎是無限的。復(fù)蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。
二、原代細(xì)胞分離
凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。1懸浮細(xì)胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。2實體組織材料的分離方法對于實體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。
三、細(xì)胞增殖檢測技術(shù)
目前主要有兩種用于檢測細(xì)胞增殖能力的方法。一種是直接的方法，通過直接測定進行分裂
的細(xì)胞數(shù)來評價細(xì)胞的增殖能力。另一種是間接的方法，即細(xì)胞活力（cell viability）檢測方法，通過檢測樣品中健康細(xì)胞的數(shù)目來評價細(xì)胞的增殖能力。顯然，細(xì)胞活力檢測法并不能終證明檢測樣品中的細(xì)胞是否在增殖。如細(xì)胞在某一培養(yǎng)條件下會自發(fā)啟動凋亡程序，但的干擾可抑制凋亡的發(fā)生；這時若采用細(xì)胞活力檢測法，顯然可以區(qū)分兩種條件下的細(xì)胞數(shù)量，但我們并不能從干擾組細(xì)胞數(shù)大于對照組的事實說明可促進細(xì)胞增殖的結(jié)論。所以直接的證據(jù)應(yīng)該采用方法一。
其中常見檢測：CCK8檢測法 ，MTT檢測法，Brdu檢測法，Edu檢測法，平板克隆形成。
四、細(xì)胞周期檢測技術(shù)
細(xì)胞周期指由細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次細(xì)胞分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過程，所需的時間叫細(xì)胞周期時間。
常用的方法：流式檢測細(xì)胞周期，標(biāo)記有絲分裂百分率法。
五、細(xì)胞凋亡檢測
常見檢測方法：流式檢測細(xì)胞凋亡，線粒體膜電位，活性氧檢測，Hoechst染色，電鏡，TUNEL。