我司全程提供細胞生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應用、組織、凍存條件等復蘇及凍存細胞株說明書信息，我們專業(yè)您的細胞系實驗，讓您實驗再無煩擾！
英文簡稱：NCI-H446細胞
產品名稱：小細胞肺癌細胞；NCI-H446
貨號：BJ-01X8550
規(guī)格：T25
形態(tài)特性:上皮樣
生長特性:貼壁/懸浮生長，混合
特征特性:該細胞是1982年由CarneyD和GazdarAF等從一位小細胞肺癌患者的胸腔積液中建立的。細胞的原始形態(tài)并不具有小細胞肺癌特征。這個細胞株是小細胞肺癌的生化和形態(tài)學上的變種，表達神經元特有的烯醇酶和腦型肌酸激酶同工酶；多巴脫羧酶、蠶素、抗****、催產素或胃泌**釋放肽未達到可檢測水平。與正常細胞相比，該細胞CS-mycD
細胞傳代步驟：
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
實驗要點及說明 :
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為玻璃**，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織完全被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
phospho-RPS6KA1(Thr348) 磷酸化磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
phospho-RPS6KA1(Ser363) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
phospho-RPS6KA1(Ser352) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
VIP receptor 2/VPAC2 腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體-II/血管活性腸肽受體-II抗體規(guī)格: 0.1ml
PACAP R1 腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體1抗體規(guī)格: 0.1ml
PACAP-27/38 腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27/38抗體規(guī)格: 0.1ml
PACAP-38 腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38抗體規(guī)格: 0.1ml
PABP 多聚腺苷酸結合蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
PABP (Methyl Arg455/460) 甲基化多聚腺苷酸結合蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
PADI4 關節(jié)炎相關基因抗體規(guī)格: 0.2ml
PAF 血小板活化因子抗體規(guī)格: 0.1ml
PALB2 乳腺癌易感基因相關蛋白2規(guī)格: 0.1ml
PAFAH2/Lp-PLA2 脂蛋白磷脂酶A2抗體規(guī)格: 0.1ml
小細胞肺癌細胞；NCI-H446緩沖動力-硝酸鹽培養(yǎng)基 Buffered Power - nitrate medium 250g
丁香樹脂醇雙葡萄糖苷 Syringaresinol-di-O-glucoside 66791-77-3 10mg
100mL 吐溫 -80 Tween-80 室溫密封保存
藁本內酯 Ligustilide 4431-01-0 20mg
R2A液體培養(yǎng)基 R2A Liquid Medium 250g
改良克氏雙糖鐵培養(yǎng)基 Modified KIA Iron Medium 250g
3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂 用于副溶血性弧的生長試驗。（SN0173-2010和GB/T4789.7-2008） 250g
50mL Calcium Chloride Solution（氯化鈣溶液）, 1M Calcium Chloride Solution, 1M 常溫保存
200 mL 小鼠白 分離液1.093 Cell Separation Solution -20℃保存
60μL 驢抗山羊IgG，辣根過氧化物酶標記 Donkey Anti-Goat IgG,HRP Conjugate -20℃保存
50T 甲型副傷寒沙門氏PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
250mL Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH8.0 Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH8.0 常溫保存
蘆?。ㄨb別用純度95%） Rutin 153-18-4 20mg