我司全程提供細胞生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應用、組織、凍存條件等復蘇及凍存細胞株說明書信息，我們專業(yè)您的細胞系實驗，讓您實驗再無煩擾！
英文簡稱：HFL1細胞
產品名稱：肺成纖維細胞；HFL1
貨號：BJ-01X8568
規(guī)格：T25
形態(tài)特性:成纖維細胞樣
生長特性:貼壁生長
特征特性:該細胞為穩(wěn)定二倍體細胞。
培養(yǎng)條件:F12K+10%FBS
傳代方法:消化CQ-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
細胞傳代步驟：
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
實驗要點及說明 :
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為玻璃制造，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織完全被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
BRN3A 轉錄因子Brn3蛋白抗體Brn3α規(guī)格: 0.1ml
Brs3/Bombesin Receptor 3 蛙皮素受體3抗體規(guī)格: 0.1ml
SMARCA4/SNF2 beta/BRG1 抑癌基因SNF2β抗體規(guī)格: 0.2ml
BRMS-1 乳腺癌轉移抑制基因1抗體規(guī)格: 0.1ml
Brucella 布氏桿體蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
BSA/Bovine Serum Albumin 牛血清白蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
BSEP/ABCB11 膽汁酸鹽輸出泵蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
Bone sialoprotein 骨涎蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
BTG2/TIS21 B 遷移基因2抗體規(guī)格: 0.1ml
BTK/ATK 蛋白酪氨酸激酶ATK抗體規(guī)格: 0.2ml
Phospho-Btk(Ser180) 磷酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗體規(guī)格: 0.1ml
Phospho-BTK/BPK(Tyr223) 磷酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗體規(guī)格: 0.1ml
BAP135/TFII I 蛋白酪氨酸激酶BAP135抗體規(guī)格: 0.2ml
肺成纖維細胞；HFL15次 TMB法辛雜交試劑盒
二氫血根堿 Dihydrosanguinarine 3606-45-9 20mg
2 ug pUSE （Amp） pUSE （Amp） 低溫運輸，-20℃保存
BSSA培養(yǎng)基 BSSA Medium 250g
50T 禽流感病毒H7亞型PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
澤瀉醇A醋酸酯 Alisol A,24-acetate 18674-16-3 10mg
125mL PIPES Lysis Buffer with Triton，2X PIPES Lysis Buffer with Triton，2X 常溫保存
改良馬丁培養(yǎng)基（真培養(yǎng)基） 用于真培養(yǎng)及藥品和生物制品無檢查用。（《中華人民共和國藥典》2010年版） 250g
100mg 4- 甲基傘形酮 -β-D- 葡糖苷酸 4-MUG 4℃避光保存
200 mL 大鼠腫瘤 分離液1.061 Cell Separation Solution -20℃保存
50T 人E-選擇素S128R基因多態(tài)性檢測試劑盒(PCR-RLFP) 低溫運輸，-20℃保存
巴利森苷E Parishin E 952068-57-4 10mg