原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

以胚胎小鼠為例
1．取材：將孕鼠拉頸椎處死，投入75%酒精浸泡數(shù)秒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蠟盤中用大頭針固定。用手術(shù)器械逐層分離皮膚和肌肉組織，打開腹腔。注意不同的解剖層次使用不同的器械。后取出雙角置于無菌平皿內(nèi)。
2．用Hanks液洗滌3次，剪開取出胚胎。血液和筋膜等組織。
3．用彎頭剪把胚胎盡量剪碎，每個(gè)組織塊小于1mm3。在操作時(shí)應(yīng)盡量將平皿蓋半蓋住平皿以防空氣中塵埃落下污染組織。再用Hanks液洗滌2~3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按兩種方法進(jìn)行，即消化法和組織塊培養(yǎng)法。
4．若使用消化法，則將組織塊放人三角燒瓶內(nèi)加入10~30mL0.125%胰蛋白酶，37℃磁力攪拌消化20多min。然后加入少量血清終止消化。用幾層無菌紗布過濾。取過濾液，800r/min離心5~10min收集細(xì)胞。棄上清，加入帶有雙抗的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
注：細(xì)胞分離的方法各實(shí)驗(yàn)室不同，所采用的消化酶也不相同（如膠原酶，透明質(zhì)酶等）。
5．若進(jìn)行組織塊培養(yǎng)，則不做步驟4，加入幾滴血清于組織塊中，再用彎頭吸管將組織塊懸液吸起。在一小培養(yǎng)瓶中逐個(gè)鋪展開，注意將瓶底涂抹均勻。將瓶子翻轉(zhuǎn)倒置后在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)放置2－3h。待組織塊微干與瓶壁粘牢后再輕輕將瓶子翻轉(zhuǎn)過來，從邊角加入4~5mL培養(yǎng)基，使細(xì)胞接觸到培養(yǎng)基，放培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。

產(chǎn)品貨號(hào)	P-X1532	產(chǎn)品規(guī)格	5×105
組織來源	主動(dòng)脈組織	生長特性	貼壁
細(xì)胞形態(tài)	成纖維細(xì)胞樣	產(chǎn)品類別	大鼠原代細(xì)胞
傳代特性	可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳	用途	僅供科研

細(xì)胞簡介：

大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自主動(dòng)脈組織；主動(dòng)脈是體循環(huán)的動(dòng)脈主干。其運(yùn)行路徑為：升主動(dòng)脈起于左心室，至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動(dòng)脈弓，弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動(dòng)脈；在第12胸椎體高度穿膈的主動(dòng)脈裂孔移行為腹主動(dòng)脈，以上為胸主動(dòng)脈，至第4腰椎體下緣分為左、右髂總動(dòng)脈；髂總動(dòng)脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi)、外動(dòng)脈。主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞在心血管發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，以主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象，探討心血管相關(guān)發(fā)病機(jī)制是目前研究的熱點(diǎn)；體外培養(yǎng)的主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

相關(guān)產(chǎn)品：

兔大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 Rabbit primary great saphenous vein endothelial cells	雜交瘤細(xì)胞；2C5
小鼠支氣管上皮細(xì)胞 Mouse primary bronchial epithelial cells	雜交瘤細(xì)胞；15B8
Hey（人卵巢癌細(xì)胞)(STR鑒定正確)	人霍奇金瘤細(xì)胞
人胃癌組織源細(xì)胞	人宮頸癌多藥耐藥細(xì)胞
MGC80-3 (人胃癌細(xì)胞) (Hela污染細(xì)胞系，暫不供應(yīng))	兔大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 Rabbit primary great saphenous vein endothelial cells
人乳腺癌細(xì)胞；MCF 7B	人食管癌細(xì)胞；NEC

Yellow fever virus envelope glycoprotein E	大鼠肥大細(xì)胞類胰凝乳蛋白酶elisa分析檢測試劑盒
NDUFAB1	同源盒蛋白A2抗體
NADH氧化還原酶輔酶α1/β1抗體	PDCD6
核酮糖1,5二磷酸羧化酶抗體  Anti-RUBISCO	凋亡相關(guān)蛋白6抗體
黃熱病毒包膜糖蛋白抗體	山羊黃體**素(LH)elisa分析檢測試劑盒
肺表面活性蛋白D抗體  Anti-SP-D/PSPD	Rat Mast Cell Chymase ELISA Kit
類固醇受體激活蛋白3抗體  Anti-NCOA3/KAT13B/AIB1/SRC-3	S100鈣結(jié)合蛋白A10抗體  Anti-S100A10
FAM123C蛋白抗體	睪丸特異激酶底物蛋白抗體  Anti-TSKS
金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體（C端）  Anti-TIMP-1(CT)	根蛋白抗體  Anti-Radixin
FAM123C	NK細(xì)胞受體2C抗體  Anti-NKG2C
肌微管素相關(guān)蛋白3抗體	腎胺酶抗體  Anti-Renalase
鋅指蛋白786抗體  Anti-ZNF786	人胰腺癌細(xì)胞；HS 766T
神經(jīng)肽S受體1/G蛋白偶聯(lián)受體154抗體  Anti-NPSR1/GPR154	MTMR3
CACNG6	小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)elisa檢測試劑盒
神經(jīng)元電壓門控鈣通道γ6抗體	痙攣性截癱蛋白7/基質(zhì)細(xì)胞粘附調(diào)節(jié)蛋白抗體  Anti-SPG7/Paraplegin
JAK和微管相互作用蛋白2/JAK和微管相互作用蛋白2抗體	大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞JAKMIP2

注意事項(xiàng)：

1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。