原代細胞實驗步驟：

以胚胎小鼠為例
1．取材：將孕鼠拉頸椎處死，投入75%酒精浸泡數(shù)秒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蠟盤中用大頭針固定。用手術器械逐層分離皮膚和肌肉組織，打開腹腔。注意不同的解剖層次使用不同的器械。后取出雙角置于無菌平皿內。
2．用Hanks液洗滌3次，剪開取出胚胎。血液和筋膜等組織。
3．用彎頭剪把胚胎盡量剪碎，每個組織塊小于1mm3。在操作時應盡量將平皿蓋半蓋住平皿以防空氣中塵埃落下污染組織。再用Hanks液洗滌2~3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按兩種方法進行，即消化法和組織塊培養(yǎng)法。
4．若使用消化法，則將組織塊放人三角燒瓶內加入10~30mL0.125%胰蛋白酶，37℃磁力攪拌消化20多min。然后加入少量血清終止消化。用幾層無菌紗布過濾。取過濾液，800r/min離心5~10min收集細胞。棄上清，加入帶有雙抗的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
注：細胞分離的方法各實驗室不同，所采用的消化酶也不相同（如膠原酶，透明質酶等）。
5．若進行組織塊培養(yǎng)，則不做步驟4，加入幾滴血清于組織塊中，再用彎頭吸管將組織塊懸液吸起。在一小培養(yǎng)瓶中逐個鋪展開，注意將瓶底涂抹均勻。將瓶子翻轉倒置后在37℃培養(yǎng)箱內放置2－3h。待組織塊微干與瓶壁粘牢后再輕輕將瓶子翻轉過來，從邊角加入4~5mL培養(yǎng)基，使細胞接觸到培養(yǎng)基，放培養(yǎng)箱內繼續(xù)進行培養(yǎng)。

產(chǎn)品貨號	P-X1779	產(chǎn)品規(guī)格	5×105
組織來源	冠狀動脈	生長特性	貼壁
細胞形態(tài)	內皮細胞樣	產(chǎn)品類別	小鼠原代細胞
傳代特性	可傳2-3代	用途	僅供科研

細胞簡介：

小鼠冠狀動脈內皮細胞分離自冠狀動脈組織；冠狀動脈是供給心臟血液的動脈，起于主動脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則，將冠狀動脈的分布分為三型：右優(yōu)勢型、均衡型、左優(yōu)勢型。左右冠狀動脈是升主動脈的對分支。左冠狀動脈為一短干，發(fā)自左主動脈竇，經(jīng)肺動脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動脈的后室間支相吻合。冠狀動脈內皮細胞呈單層扁平分布，是一薄層的專門上皮細胞，它形成冠狀動脈的內壁，是血管管腔內血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內皮細胞是沿著整個循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至小的微血管。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠冠狀動脈內皮細胞采用混合酶短暫消化后組織貼塊、結合內皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

公司實驗室分離的小鼠冠狀動脈內皮細胞經(jīng)CD31熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

相關產(chǎn)品：

兔鼻腔粘膜上皮細胞 Primary nasal mucosal epithelial cells of rabbits	小鼠雜交瘤細胞株；4E11
小鼠主動脈內皮細胞 Mouse aortic endothelial cells；MAEC	小鼠雜交瘤細胞株；GPC3-1H5
KHOS-240S（人骨肉瘤細胞）(STR鑒定正確)	人骨髓細胞
小鼠滋養(yǎng)層干細胞	胃癌二甲雙胍耐藥細胞株
MDBK [NBL-1] (牛腎細胞)	兔鼻腔粘膜上皮細胞 Primary nasal mucosal epithelial cells of rabbits
人前列腺癌細胞；VCaP	人急性單核細胞白血病細胞；THP-1

NDUFAF7	PE-Cy7標記的兔抗人IgG H&L
C6orf186	羧酸酯酶2抗體
6號染色體開放閱讀框186抗體	KHDRBS2
植物種子葉綠體粗提分離試劑盒	KHDRBS2蛋白抗體
NDUFAF7蛋白抗體	RSPH10B蛋白抗體
大鼠糖原合酶激酶3β(GSK3β)elisa檢測試劑盒	Rabbit Anti-Human IgG H&L / PE-Cy7
可溶性酸性轉化酶（S-AI）測試盒	味覺感受器蛋白T2R38抗體  Anti-T2R38/TAS2R38
人巢蛋白1(NID1)elisa分析檢測試劑盒	轉綠調節(jié)因子SLTM抗體  Anti-SLTM
人肝X受體β(LXRβ)elisa檢測試劑盒	KLHDC9蛋白抗體  Anti-KLHDC9
NID1檢測試劑盒	p21活化蛋白激酶ARHG7抗體  Anti-PAK3/ARHG7
魚生長(GH)elisa分析檢測試劑盒	CCK-8(水溶性四氮唑－8) 比色法細胞繁殖測定試劑盒
動物源性食品羊源基因檢測試劑盒	人乳腺癌細胞（上皮粘性蛋白基因修飾）；Ecad231-9
山羊肝脂酶(HL)elisa檢測試劑盒	GH ELISA Kit
KLK1檢測試劑盒	NT-3檢測試劑盒
人激肽釋放酶1(KLK 1)elisa分析檢測試劑盒	大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)elisa分析檢測試劑盒
大鼠丙氨酸氨基轉移酶(ALT)elisa分析檢測試劑盒	小鼠冠狀動脈內皮細胞ALT ELISA Kit

注意事項：

1.收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。