原代細胞培養(yǎng)的具體操作步驟?：
組織來源
腦組織
貨號
P-X1943
產品規(guī)格
5×105
生長特性
貼壁
產品類別
小鼠原代細胞
細胞形態(tài)
內皮細胞樣
小鼠腦微血管內皮細胞分離自腦組織；腦微血管內皮細胞是血腦屏障的主要組成成分，它是組成腦微血管腔面單層扁平上皮樣細胞，能夠限制可溶性物質和細胞等從血液進入大腦，大腦微血管內皮細胞與外周內皮細胞相比具有一些相同特性。它所產生和分泌的生物活性物質對維持血管張力、調節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在腦血管的發(fā)病機制中有重要病理生理學意義。與外周內皮細胞相同，大腦微血管內皮細胞表面表達細胞粘附分子，調控白細胞進入大腦。由于微血管內皮細胞的器官特異性，內皮細胞通常取源于研究的相關組織。其主要特征如下：①腦微血管內皮細胞存在許多細胞間緊密連接，產生很高的跨內皮阻抗，延遲細胞旁的通量；②腦微血管內皮細胞缺乏內皮細胞的窗孔結構，其液相物質胞飲水平較低；③腦微血管內皮細胞具有不對稱定位酶和載體介導轉運系統(tǒng)，從而產生“兩極分化”的表現(xiàn)型。
1.?組織處理?：將動物組織從機體中取出，剪碎后用胰蛋白酶等消化酶處理，使其分散成單個細胞。
?2.細胞計數(shù)?：使用血細胞計數(shù)器或其他方法對細胞進行計數(shù)，確保細胞密度適中。
3.?接種培養(yǎng)?：將細胞懸液接種到培養(yǎng)瓶中，加入適量的培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.?換液和傳代?：定期更換培養(yǎng)液，當細胞達到一定密度時進行傳代培養(yǎng)，以維持細胞的生長狀態(tài)。
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠腦微血管內皮細胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法結合密度梯度離心法、后通過內皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：公司實驗室分離的小鼠腦微血管內皮細胞經CD31熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
培養(yǎng)信息：包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
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原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)的區(qū)別：
1. 細胞來源
原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)是指從生物體組織中直接分離出的細胞進行的培養(yǎng)。這些細胞通常來自活檢樣本或手術摘除的組織。原代培養(yǎng)的細胞尚未經過任何實驗室的人工選擇或適應。組織傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)指的是經過初次分離培養(yǎng)后的細胞，在體外環(huán)境中經過多次分裂和增殖后的細胞。這些細胞已經適應了人工培養(yǎng)條件，并可以通過傳代方式多次增殖。
2. 培養(yǎng)過程
原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)的過程通常包括組織的解離、細胞的分離、種植和培養(yǎng)等步驟。原代細胞培養(yǎng)的目的是獲得足夠數(shù)量的細胞，以進行進一步的實驗研究或建立穩(wěn)定的細胞系。
傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)的過程涉及到將已經適應體外培養(yǎng)條件的細胞從培養(yǎng)容器中分離出來，然后重新種植到新的培養(yǎng)容器中進行進一步培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)通常需要在細胞達到一定密度或出現(xiàn)接觸抑制時進行。
3. 細胞特性
原代培養(yǎng)：原代細胞通常具有更接近自然狀態(tài)下的生物學特性，包括基因表達、酶活性、信號傳導等。這些特性使得原代細胞成為研究生理和病理條件下細胞行為的重要工具。
傳代培養(yǎng)：傳代細胞由于長期在體外環(huán)境中生長，可能會發(fā)生一些生物學特性的改變。這些改變可能包括基因表達的變化、細胞形態(tài)的變異、生長速率的增加等。因此，傳代細胞可能需要進行鑒定和驗證，以確保其仍具有所需的生物學特性。
4.培養(yǎng)結果
原代培養(yǎng)：所獲得的細胞在形態(tài)結構和功能活動上與體內原組織相似性大，更接近于生物體內的生活狀態(tài)。這種培養(yǎng)方法常用于研究細胞在生理狀態(tài)下的生長、代謝和繁殖。
傳代培養(yǎng)：由于細胞已適應體外環(huán)境并且增殖速度快，傳代培養(yǎng)一般適用于獲得大量同種細胞以滿足實驗需求，如構建組織工程產品、篩選和毒性測試等。5. 應用領域
原代培養(yǎng)：原代細胞通常用于篩選、毒理學測試、模型研究等領域。由于其保留了生物體的自然特性，因此被認為是更接近體內條件的模型系統(tǒng)。
傳代培養(yǎng)：傳代細胞被廣泛用于各種生物學研究，包括基因表達調控、信號轉導、細胞周期調控等。傳代細胞系的穩(wěn)定性和一致性使得它們成為研究細胞生物學機制的理想模型。
6. 注意事項
原代培養(yǎng)：需要嚴格控制無菌條件，避免細胞污染；注意細胞的存活率和純度，避免其他類型細胞的混雜；以及考慮細胞在體外環(huán)境下可能發(fā)生的表型和基因型改變。
傳代培養(yǎng)：需要關注細胞的生長狀態(tài)和形態(tài)變化，定期檢查細胞是否存在污染或變異；注意傳代次數(shù)，因為過多的傳代可能導致細胞老化或轉化。
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?原代細胞培養(yǎng)的注意事項?：
一、在進行原代細胞培養(yǎng)時，需要注意以下幾點：
二、?無菌操作?：整個過程需要在無菌條件下進行，以防止污染。
?三、細胞融合和傳代?：跟蹤細胞的融合狀態(tài)，適時進行傳代，避免細胞分化。
?四、冷凍保存和復蘇?：對于需要長期保存的細胞，可以進行冷凍保存，并注意復蘇時的操作細節(jié)。
?五、培養(yǎng)基的選擇和更換?：根據(jù)細胞類型選擇合適的培養(yǎng)基，并定期更換以保證營養(yǎng)充足。