細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
原代細胞分離:
訂購信息:
英文簡稱:RMC細胞
產(chǎn)品名稱:大鼠腎系膜細胞
貨號:BJ-01X10551
規(guī)格:腎系膜
形態(tài)特性:DMEM
生長特性:貼壁
【培養(yǎng)指南】
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
【細胞凍存】
待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行293/HEK-293細胞|細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應(yīng)將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
【復(fù)蘇的原則】
快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶,對細胞造成損害。復(fù)旦細胞庫各地均可發(fā)貨,統(tǒng)一價格,本公司出售的所有細胞僅供科研使用。
一、細胞培養(yǎng)
1取材 在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞(視實驗?zāi)康亩ǎ?,?jīng)過一定的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養(yǎng)器血中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。2培養(yǎng) 將取得的組織細胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。3凍存及復(fù)蘇(可參閱后面有關(guān)章節(jié))為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基,以一定的冷卻速度凍存,保存于液氮中。在極低的溫度下,細胞保存的時間幾乎是無限的。復(fù)蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。
二、原代細胞分離
凡是來源于胚胎、組織器官及外周血,經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞稱之為原代細胞。1懸浮細胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。2實體組織材料的分離方法對于實體組織材料,由于細胞間結(jié)合緊密,為了使組織中的細胞充分分散,形成細胞懸液,可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。
三、細胞增殖檢測技術(shù)
目前主要有兩種用于檢測細胞增殖能力的方法。一種是直接的方法,通過直接測定進行分裂
的細胞數(shù)來評價細胞的增殖能力。另一種是間接的方法,即細胞活力(cell viability)檢測方法,通過檢測樣品中健康細胞的數(shù)目來評價細胞的增殖能力。顯然,細胞活力檢測法并不能終證明檢測樣品中的細胞是否在增殖。如細胞在某一培養(yǎng)條件下會自發(fā)啟動凋亡程序,但的干擾可抑制凋亡的發(fā)生;這時若采用細胞活力檢測法,顯然可以區(qū)分兩種條件下的細胞數(shù)量,但我們并不能從干擾組細胞數(shù)大于對照組的事實說明可促進細胞增殖的結(jié)論。所以直接的證據(jù)應(yīng)該采用方法一。
其中常見檢測:CCK8檢測法 ,MTT檢測法,Brdu檢測法,Edu檢測法,平板克隆形成。
四、細胞周期檢測技術(shù)
細胞周期指由細胞分裂結(jié)束到下一次細胞分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過程,所需的時間叫細胞周期時間。
常用的方法:流式檢測細胞周期,標記有絲分裂百分率法。
五、細胞凋亡檢測
常見檢測方法:流式檢測細胞凋亡,線粒體膜電位,活性氧檢測,Hoechst染色,電鏡,TUNEL。
B-RAF激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
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C-TAK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
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CaM KII激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
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CaM KIV激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織CaM KIV激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
CASEIN KINASE 1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織CASEIN KINASE 1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
CASEIN KINASE 1δ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織CASEIN KINASE 1δ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
CASEIN KINASE 2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
大鼠腎系膜細胞25mg Oligo(dT)纖維素 Oligo (dT) Cellulose 4℃保存
0.1mL×10 BL21(DE3)pLysS化學(xué)感受態(tài) BL21 (DE3) pLysS Competent Cell -80℃保存
1瓶 JEG-3/VP16 株 JEG-3/VP16 低溫運輸和保存
25g L- 天門冬氨酸 L-Aspartic Acid 室溫保存
遠志呫噸酮III Polygalaxanthone III 162857-78-5 20mg
0.1mL×10 XL1-Blue化學(xué)感受態(tài) XL1-Blue Competent Cell -80℃保存
125mL Glucose Solution(葡萄糖溶液),1M Glucose Solution,1M 常溫保存
1g 3,3’- 二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸 DAB HCl -20℃保存
馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA) Potato Dextrose Agar 250g
100mL 三氟乙酸 TFA(Trifluoroacetic Acid) 室溫保存
UIM培養(yǎng)管 細生化鑒定 20支/盒
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基管 7.5ml*20支/盒
五味子酯乙 Schisantherin B 58546-55-7 20mg