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英文簡稱:SCC7 細胞
產(chǎn)品名稱:小鼠鱗狀細胞癌細胞
貨號:BJ-01X10613
規(guī)格:鱗狀細胞癌
形態(tài)特性:1640
生長特性:貼壁
【培養(yǎng)指南】
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
【細胞凍存】
待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行293/HEK-293細胞|細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
【復蘇的原則】
快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶,對細胞造成損害。復旦細胞庫各地均可發(fā)貨,統(tǒng)一價格,本公司出售的所有細胞僅供科研使用。
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
體液單胺氧化酶(MAO)總活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
單胺氧化酶A型(MAO-A)活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織單胺氧化酶A型(MAO-A)活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
體液單胺氧化酶A型(MAO-A)活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
單胺氧化酶B型(MAO-B)活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織單胺氧化酶B型(MAO-B)活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
體液單胺氧化酶B型(MAO-B)活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
單胺氧化酶(MAO)總活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織單胺氧化酶(MAO)總活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20/50次
體液單胺氧化酶(MAO)總活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
單胺氧化酶A型(MAO-A)活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織單胺氧化酶A型(MAO-A)活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
體液單胺氧化酶A型(MAO-A)活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
小鼠鱗狀細胞癌細胞瓊脂培養(yǎng)基S Agar medium S(R2A) 250g
察氏瓊脂 Czapek Dox Agar 250g
芝麻林素 Sesamolin 526-07-8 10mg
2 ug pMXS Tomato2(799) pMXS Tomato2(799) 低溫運輸,-20℃保存
煙酸測定培養(yǎng)基 Folic Acid Assay Medium 250g
里卡靈A Licarin A 51020-86-1 5mg
5次 PCR法DNA探針辛標記試劑盒 PCR DNA Labeling Kit Series -20℃保存
50T 白色念珠PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
TSA培養(yǎng)基平板(9cm) TSA 10個/包
2 ug pRNAi-pur-H1 Lul/rxn pRNAi-pur-H1 Lul/rxn 低溫運輸,-20℃保存
即用型營養(yǎng)瓊脂平板 用于細總數(shù)的測定。(GB、ISO) 90mmX20個
5g 乙酸 Iodoacetic Acid -20℃保存
250mL 非凍型組織RNA保存液 RNALOCKER 常溫
原代細胞分離:
一、細胞培養(yǎng)
1取材 在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定),經(jīng)過一定的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養(yǎng)器血中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。2培養(yǎng) 將取得的組織細胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。3凍存及復蘇(可參閱后面有關章節(jié))為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基,以一定的冷卻速度凍存,保存于液氮中。在極低的溫度下,細胞保存的時間幾乎是無限的。復蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。
二、原代細胞分離
凡是來源于胚胎、組織器官及外周血,經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞稱之為原代細胞。1懸浮細胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。2實體組織材料的分離方法對于實體組織材料,由于細胞間結(jié)合緊密,為了使組織中的細胞充分分散,形成細胞懸液,可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。
三、細胞增殖檢測技術
目前主要有兩種用于檢測細胞增殖能力的方法。一種是直接的方法,通過直接測定進行分裂
的細胞數(shù)來評價細胞的增殖能力。另一種是間接的方法,即細胞活力(cell viability)檢測方法,通過檢測樣品中健康細胞的數(shù)目來評價細胞的增殖能力。顯然,細胞活力檢測法并不能終證明檢測樣品中的細胞是否在增殖。如細胞在某一培養(yǎng)條件下會自發(fā)啟動凋亡程序,但的干擾可抑制凋亡的發(fā)生;這時若采用細胞活力檢測法,顯然可以區(qū)分兩種條件下的細胞數(shù)量,但我們并不能從干擾組細胞數(shù)大于對照組的事實說明可促進細胞增殖的結(jié)論。所以直接的證據(jù)應該采用方法一。
其中常見檢測:CCK8檢測法 ,MTT檢測法,Brdu檢測法,Edu檢測法,平板克隆形成。
四、細胞周期檢測技術
細胞周期指由細胞分裂結(jié)束到下一次細胞分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過程,所需的時間叫細胞周期時間。
常用的方法:流式檢測細胞周期,標記有絲分裂百分率法。
五、細胞凋亡檢測
常見檢測方法:流式檢測細胞凋亡,線粒體膜電位,活性氧檢測,Hoechst染色,電鏡,TUNEL。