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產(chǎn)品中心
產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:表皮黑色素細(xì)胞

  • 產(chǎn)品型號:BJ-01X10675
  • 產(chǎn)品**:邦景
  • 產(chǎn)品文檔:
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簡單介紹:
接收到表皮黑色素細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對表皮黑色素細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
詳情介紹:

細(xì)胞培養(yǎng)方法:

1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;

③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇:

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)

②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;

④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

原代細(xì)胞分離:

訂購信息:

英文簡稱:HEM-L細(xì)胞

產(chǎn)品名稱:表皮黑色素細(xì)胞

貨號:BJ-01X10675

規(guī)格:表皮黑色素細(xì)胞

形態(tài)特性:DMEM

生長特性:貼壁

【培養(yǎng)指南】

對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。


【細(xì)胞凍存】

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進行293/HEK-293細(xì)胞|細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。

【復(fù)蘇的原則】

快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對細(xì)胞造成損害。復(fù)旦細(xì)胞庫各地均可發(fā)貨,統(tǒng)一價格,本公司出售的所有細(xì)胞僅供科研使用。

一、細(xì)胞培養(yǎng)

1取材 在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細(xì)胞(視實驗?zāi)康亩ǎ?,?jīng)過一定的處理(如消化分散細(xì)胞、分離等)后接入培養(yǎng)器血中,這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。2培養(yǎng) 將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。3凍存及復(fù)蘇(可參閱后面有關(guān)章節(jié))為了保存細(xì)胞,特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株,要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基,以一定的冷卻速度凍存,保存于液氮中。在極低的溫度下,細(xì)胞保存的時間幾乎是無限的。復(fù)蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。

二、原代細(xì)胞分離

凡是來源于胚胎、組織器官及外周血,經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。1懸浮細(xì)胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。2實體組織材料的分離方法對于實體組織材料,由于細(xì)胞間結(jié)合緊密,為了使組織中的細(xì)胞充分分散,形成細(xì)胞懸液,可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。

三、細(xì)胞增殖檢測技術(shù)

目前主要有兩種用于檢測細(xì)胞增殖能力的方法。一種是直接的方法,通過直接測定進行分裂

的細(xì)胞數(shù)來評價細(xì)胞的增殖能力。另一種是間接的方法,即細(xì)胞活力(cell viability)檢測方法,通過檢測樣品中健康細(xì)胞的數(shù)目來評價細(xì)胞的增殖能力。顯然,細(xì)胞活力檢測法并不能終證明檢測樣品中的細(xì)胞是否在增殖。如細(xì)胞在某一培養(yǎng)條件下會自發(fā)啟動凋亡程序,但的干擾可抑制凋亡的發(fā)生;這時若采用細(xì)胞活力檢測法,顯然可以區(qū)分兩種條件下的細(xì)胞數(shù)量,但我們并不能從干擾組細(xì)胞數(shù)大于對照組的事實說明可促進細(xì)胞增殖的結(jié)論。所以直接的證據(jù)應(yīng)該采用方法一。

其中常見檢測:CCK8檢測法 ,MTT檢測法,Brdu檢測法,Edu檢測法,平板克隆形成。

四、細(xì)胞周期檢測技術(shù)

細(xì)胞周期指由細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次細(xì)胞分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過程,所需的時間叫細(xì)胞周期時間。

常用的方法:流式檢測細(xì)胞周期,標(biāo)記有絲分裂百分率法。

五、細(xì)胞凋亡檢測

常見檢測方法:流式檢測細(xì)胞凋亡,線粒體膜電位,活性氧檢測,Hoechst染色,電鏡,TUNEL。

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10mL His標(biāo)簽蛋白專用蛋白酶抑制劑 Protease Inhibitor for His-tagged Protein -20℃保存

2 ug pCold II pCold II 低溫運輸,-20℃保存

1g D- 生物素 ( 維生素 H) D-Biotin 4℃保存

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