微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 放線菌孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過(guò)0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備

種子罐種子制備的工藝過(guò)程，因菌種不同而異，一般可分為種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為種子，把種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級(jí)種子，將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理，使用三級(jí)種子的發(fā)酵，稱為四級(jí)發(fā)酵。

基本信息：

產(chǎn)品名稱：蛹蟲(chóng)草規(guī)格

拉丁文: Cordyceps│militaris

提供形式: 斜面培養(yǎng)物

**等級(jí): 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: 14

生長(zhǎng)條件: 25-28℃

存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

培養(yǎng)方法:

培養(yǎng)基 0012

生長(zhǎng)條件 28℃

存儲(chǔ)條件 液氮超低溫凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法

培養(yǎng)及打管說(shuō)明：

1、安瓿瓶開(kāi)封：用浸過(guò)75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無(wú)菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開(kāi)的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保藏方法：

1. 傳代培養(yǎng)保藏法

又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧**用），培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。

2. 液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。

3. 載體保藏法

是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。

4. 寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲(chóng)、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。

5. 冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6. 冷凍干燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來(lái)制備細(xì)胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。

金黃色葡萄球顯色培養(yǎng)基 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 用于金黃色葡萄球的顯色培養(yǎng) Staphylococcus Chromogenic Medium 1000ml

VRBG 瓊脂 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 用于奶粉中坂崎桿的分離培養(yǎng)(FDA方法) VRBGA Agar 250

精氨酸雙水解酶試驗(yàn)用培養(yǎng)基(AD) 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 生化培養(yǎng)基，用于弧的精氨酸試驗(yàn)  5

半固體動(dòng)力培養(yǎng)基   進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 用于動(dòng)力觀察，種保存，H抗原位相變異試驗(yàn)等（SN標(biāo)準(zhǔn)） Motility Test Medium(Semisolid) 250

胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ)   進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 用于蠟樣芽孢桿的溶血測(cè)試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn)) Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base 250

營(yíng)養(yǎng)瓊脂（NA）   進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 細(xì)總數(shù)測(cè)定，細(xì)傳代培養(yǎng) Nutrient Agar 250

類桿-膽汁-七葉甙（BBE）瓊脂 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 用于脆弱擬桿群的分離培養(yǎng) BBE Agar 250

7號(hào)膽鹽 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 25克 Bile salt No.7 BR

抗素磺胺類敏感試驗(yàn)瓊脂 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 250克 ASS Agar 用于磺胺類靈敏度試驗(yàn)（WHO方法）

蛹蟲(chóng)草規(guī)格CNGA2  環(huán)核苷酸陽(yáng)離子通道蛋白α2抗體 0.1ml

Penicillin G  青霉素G抗體 0.1ml

RBP/Retinol binding protein  視黃醇結(jié)合蛋白抗體 0.1ml

JMY  連接介導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白抗體 0.2ml

KLHDC8A  KLHDC8A蛋白抗體 0.2ml

LRP15  富含亮氨酸重復(fù)序列LRP15抗體 0.2ml

Tetracycline  四環(huán)素抗體 0.2ml

FBN1  原纖維蛋白1抗體 0.2ml

Nfasc186   神經(jīng)束蛋白186抗體 0.2ml

ASM/Acid sphingomyelinase  酸性神經(jīng)鞘磷脂酶抗體 0.1ml

TXA2R  血栓素A2受體抗體 0.2ml

DGCR2  DGCR2蛋白抗體 0.2ml

BCL7B  BCL7B蛋白抗體 0.2ml