基本信息：

產(chǎn)品名稱：多粘類芽孢桿菌說明書

拉丁文:

Paenibacillus polymyxa

提供形式: 凍干物

**等級: 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)2,3-丁二醇。

培養(yǎng)基: 葡萄糖營養(yǎng)瓊脂-2培養(yǎng)基：牛肉膏 10.0g，蛋白胨 10.0g，葡萄糖 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0～20.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。NA

生長條件: 30℃，好氧

存儲條件: 真空冷凍干燥法

培養(yǎng)方法:

培養(yǎng)基 0012

生長條件 28℃

存儲條件 液氮超低溫凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法

培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保藏方法：

1. 傳代培養(yǎng)保藏法

又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧**用），培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。

2. 液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。

3. 載體保藏法

是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。

4. 寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。

5. 冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6. 冷凍干燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來制備細(xì)胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對細(xì)胞的損害。

生物素偶聯(lián)牛血清白蛋白 Biotin/BSA 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:  2mg

雄受體（多肽抗原） AR (Androgen Receptor)peptide 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:  0.5mg

雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗原（N端） DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase)N terminal 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:  0.5mg

水通道蛋白-9抗原 (多肽抗原) AQP9(aquaporin Protein-9) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:  0.5mg

胃泌素（抗原） Gastrin 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:  0.5mg

胞漿-5′-核苷酸酶-Ⅱ NT5C2 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:  0.5mg

轉(zhuǎn)移生長因子–β3（抗原） TGF- Beta3 (Ttansforming Growth Factor – Beta3) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:  0.5mg

多配體蛋白聚糖1抗原 CD138/Syndecan-1 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:  0.5mg

細(xì)胞角蛋白5抗原 CK5(Cytokeratin 5) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:  0.5mg

多粘類芽孢桿菌說明書Mouse Anti-rabbit IgG/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 0.1ml

phospho-CDKN1A/P21 (Ser146)  磷酸化p21蛋白抗體 0.1ml

Donkey Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的驢抗兔IgG 0.1ml

SIAH1  泛素連接酶Siah1抗體 0.1ml

IGF1R/CD221  胰島素樣生長因子I受體抗體 0.1ml

Mouse Anti-rat IgG  小鼠抗大鼠IgG 1mg

Rabbit Anti-human IgG/APC  APC標(biāo)記的兔抗人IgG 0.1ml

PP2CA/PPM1A  蛋白磷酸酶2C亞型α抗體 0.1ml

MSH gamma  促黑細(xì)胞γ抗體 0.2ml

Ghrelin/Obestatin  腦腸肽抗體 0.1ml

phospho-Tau protein(Ser356)  磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 0.1ml

KAT3B/Ep300  轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體 0.2ml

Goat Anti-human IgG/PE  PE標(biāo)記的羊抗人IgG 0.1ml

微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 放線菌孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為種子，把種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級發(fā)酵。如果將種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級種子，將二級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級發(fā)酵。同樣道理，使用三級種子的發(fā)酵，稱為四級發(fā)酵。