微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 放線菌孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶兩級(jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為種子，把種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級(jí)種子，將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理，使用三級(jí)種子的發(fā)酵，稱為四級(jí)發(fā)酵。

基本信息：

產(chǎn)品名稱：DH5α 含pBR322質(zhì)粒 大腸桿菌保存

拉丁文:

Escherichia coli DH5α(pBR322)

提供形式: 西林瓶，菌片

**等級(jí): 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: pBR322質(zhì)粒提取。

培養(yǎng)基: LB培養(yǎng)基，含50μg/mL氨芐青霉素鈉。

酵母提取物 5.0 g,蛋白胨 10.0 g,NaCl 10.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾水 1.0 L,pH 7.0。121℃，15min**。 **結(jié)束，冷卻降溫后加入氨芐青霉素鈉，使培養(yǎng)基中氨芐青霉素鈉*終含量為50μg/mL。

生長條件: 37℃  ，好氧

存儲(chǔ)條件: -20℃

培養(yǎng)方法:

培養(yǎng)基 0012

生長條件 28℃

存儲(chǔ)條件 液氮超低溫凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法

培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保藏方法：

1. 傳代培養(yǎng)保藏法

又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧**用），培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。

2. 液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。

3. 載體保藏法

是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。

4. 寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。

5. 冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6. 冷凍干燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來制備細(xì)胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。

含鐵牛奶培養(yǎng)基 進(jìn)口、國產(chǎn) 用于產(chǎn)氣莢膜梭的牛奶發(fā)酵試驗(yàn)  250

LPM瓊脂 進(jìn)口、國產(chǎn) 用于單增李氏選擇性分離(加入七葉苷和檸檬酸鐵銨)（FDA標(biāo)準(zhǔn)） LPM Agar 250

氯化三苯四氮唑-沙保羅培養(yǎng)基   進(jìn)口、國產(chǎn) 用于分離真，酵母等 TTC-Sabourand’s Medium 250

小牛血清 進(jìn)口、國產(chǎn) 200毫升 Calf serum 診斷試劑用

胰蛋白胨     進(jìn)口、國產(chǎn) 培養(yǎng)基原材料，提供細(xì)生長氮源，含色氨酸 Tryptone 250

固體改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 進(jìn)口、國產(chǎn) 250克 Martin Solid,Modified 生物制品無試驗(yàn)的霉檢查

TSC瓊脂 進(jìn)口、國產(chǎn) 250克 TSC Agar 產(chǎn)氣莢膜梭的平板計(jì)數(shù)

MUGal肉湯 進(jìn)口、國產(chǎn) 20克 MUGal Broth 用于多管發(fā)酵法快速檢測大腸群

T1N3肉湯 進(jìn)口、國產(chǎn) 250克 T1N3 Broth 霍亂弧的生長試驗(yàn)

DH5α 含pBR322質(zhì)粒 大腸桿菌保存CCK8  膽囊收縮素8抗體 0.1ml

Desmin/DES  結(jié)蛋白抗體 0.1ml

SORBS2/ArgBP2  精氨酸結(jié)合蛋白2抗體 0.2ml

HIPK3  Fas相互作用蛋白激酶3抗體 0.2ml

MS4A3/CD20L  CD20樣蛋白抗體（造血干細(xì)胞4跨膜蛋白3） 0.2ml

IQCJ  IQCJ蛋白抗體 0.2ml

CQ028  多癌基因下調(diào)蛋白抗體 0.2ml

CYP5A1/Thromboxane synthase  血栓素合成酶抗體 0.2ml

C2ORF47  2號(hào)染色體開放閱讀框47抗體 0.2ml

Kilham Rat Virus/KRV-VP1/KRV-VP2 (C-terminus)  基爾曼氏細(xì)小VP1/VP2抗體(大鼠潛在KRV)C端 1ml

GIRK3/KCNJ9  G蛋白激活內(nèi)向鉀通道3抗體 0.1ml

phospho-AMPK beta 1(Ser108)  磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體 0.1ml

Phospho-NMDAR2A + 2B (Tyr1246 + Tyr1252)  磷酸化谷氨酸受體2A+2B抗體 0.1ml