微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 放線菌孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為種子，把種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級發(fā)酵。如果將種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級種子，將二級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級發(fā)酵。同樣道理，使用三級種子的發(fā)酵，稱為四級發(fā)酵。

基本信息：

產(chǎn)品名稱：大腸埃希氏菌保存

拉丁文:

Escherichia coli

提供形式: 定量菌片，西林瓶，2.0~3.0×10e3CFU/瓶

**等級: 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 研究；分析檢測。研究、質(zhì)量控制用菌，《GB 4789.2-2010菌落總數(shù)測定》、《GB 4789.3-2010大腸菌群計(jì)數(shù)》、研究；分析檢測。《GB/T 4789.32-2002大腸菌群的快速檢驗(yàn)》、《GB 4789.39-2013糞大腸菌群計(jì)數(shù)》陽性對照菌株，2015版中國藥典質(zhì)控菌株。

培養(yǎng)基: 營養(yǎng)肉汁瓊脂：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0

培養(yǎng)方法:

培養(yǎng)基 0012

生長條件 28℃

存儲條件 液氮超低溫凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法

培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保藏方法：

1. 傳代培養(yǎng)保藏法

又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧**用），培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。

2. 液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。

3. 載體保藏法

是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。

4. 寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。

5. 冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6. 冷凍干燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來制備細(xì)胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對細(xì)胞的損害。

酵母浸粉    進(jìn)口、國產(chǎn) 培養(yǎng)基原材料，提供細(xì)生長所需的維生素B族 Yeast Extract Powder 250

 進(jìn)口、國產(chǎn) 500毫升  

聚山梨酯80培養(yǎng)基(需氧、厭氧) 進(jìn)口、國產(chǎn) 250克 Tween80 Medium(Bacteria) 油劑的無試驗(yàn)

標(biāo)準(zhǔn)1號營養(yǎng)瓊脂 進(jìn)口、國產(chǎn) 250克 Standard Ⅰ Nutrient Agar 標(biāo)準(zhǔn)細(xì)計(jì)數(shù),含糖

Hektoen瓊脂培養(yǎng)基 進(jìn)口、國產(chǎn) 250克 Hektoen Enteric Agar 用于沙門氏屬和志賀屬的分離培養(yǎng)

耶爾森氏選擇性瓊脂 進(jìn)口、國產(chǎn) 250克 CIN Agar 分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏

A1培養(yǎng)基 進(jìn)口、國產(chǎn) 250克 A1 Medium 檢測水中的大腸群

細(xì)總數(shù)顯色培養(yǎng)基配套平皿 進(jìn)口、國產(chǎn) 9㎝/塊 Total Genes Chromogenic Medium Dish

甘露醇發(fā)酵管 進(jìn)口、國產(chǎn) 20支 甘露醇發(fā)酵管 BR

大腸埃希氏菌保存Phospho-WNK1(Thr60)  磷酸化賴氨酸缺陷型蛋白激酶1抗體 0.1ml

Mast Cell Tryptase  肥大細(xì)胞蛋白酶7抗體 0.1ml

Rabbit Anti-chicken IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗雞IgM 0.1ml

VP2  重組豬細(xì)小VP2蛋白抗體 0.2ml

Ribonuclease 6  核糖核酸酶6抗體 0.2ml

phospho-MAP3K7IP1(Thr431)  磷酸化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml

Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.1ml

NPRB  利鈉肽受體B抗體 0.2ml

Integrin beta 3/CD61  整合素β3抗體 0.1ml

Rabbit Anti-rat IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.1ml

ROCK2  Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體 0.1ml

phospho-HMGCR(Ser872)  磷酸化三羥基基輔酶A還原酶抗體 0.1ml

Phospho-YB1(Ser102)  磷酸化DNA結(jié)合蛋白B抗體 0.1ml