基本信息:
產(chǎn)品名稱:沼澤考克氏菌培養(yǎng)
拉丁文:
Kocuria palustris
提供形式: 凍干物
**等級(jí): 1
模式菌株: no
應(yīng)用領(lǐng)域: 研究。
培養(yǎng)基: 普通瓊脂:牛肉浸液 1.0L,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂20.0~25.0g,pH7.2~7.4。[注] 牛肉浸液的制備:瘦牛肉洗凈,切碎,稱取550克浸泡于1375ml水中,浸泡一夜,過(guò)濾,濾液分裝后0.6kg/cm2**40min后備用。
生長(zhǎng)條件: 30℃,好氧。
存儲(chǔ)條件: 2-8℃。真空冷凍干燥法
培養(yǎng)方法:
培養(yǎng)基 0012
生長(zhǎng)條件 28℃
存儲(chǔ)條件 液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法;定期移植法
培養(yǎng)及打管說(shuō)明:
1、安瓿瓶開(kāi)封:用浸過(guò)75%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管,用火焰加熱其頂端,滴少量無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂,用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、菌株恢復(fù)培養(yǎng):用無(wú)菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基,滴入安瓿管內(nèi),輕輕振蕩,使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液,移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中,并在建議的條件下培養(yǎng)。
3、注意事項(xiàng):菌種活化前,請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下,某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后,延遲期較長(zhǎng),需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)
4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。
5、暫不啟開(kāi)的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。
保藏方法:
1. 傳代培養(yǎng)保藏法
又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等(后者作保藏厭氧**用),培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。
2. 液體石蠟覆蓋保藏法
是傳代培養(yǎng)的變相方法,能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間,它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋的液體石蠟,一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡,另一方面可阻止氧氣進(jìn)入,以減弱代謝作用。
3. 載體保藏法
是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體,如土壤、沙子、硅膠、濾紙上,而后進(jìn)行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。
4. 寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物,如病毒、立克次氏體、螺旋體等,它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲(chóng)、雞胚內(nèi)感染并傳代,此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。
5. 冷凍保藏法
可分低溫冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速凍結(jié)(約-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。
6. 冷凍干燥保藏法
先使微生物在極低溫度(-70℃左右)下快速冷凍,然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分(真空干燥)。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來(lái)制備細(xì)胞懸液,以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。
金黃色葡萄球顯色培養(yǎng)基 5000mL/瓶
改良羅氏培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250(g)
TB medium acc.to LOENSTIN-JENSEN( base) TB培養(yǎng)基(基礎(chǔ)) 1.05400.0500MERCK默克
乳糖肉湯(LB) 250(g)
DMEM(高糖),干粉 含4500mg/l葡萄糖,L-谷氨酰胺
不含丙酮酸鈉及碳酸氫鈉12100-046
Hugh-Leifon葡萄糖肉湯(HLGB) 250(g)
D/E (Dey/Engley) Neutralizing Broth
阪崎腸桿顯色培養(yǎng)基 1000mL/瓶
卡那霉素七葉甙疊氮瓊脂基礎(chǔ)(CM0591) Oxoid
BRILA broth brilliant green-bile-lactcose broth 亮綠乳糖膽鹽肉湯 1.05454.0500MERCK默克
溶血瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
沼澤考克氏菌培養(yǎng)Syntrophins/SNTA1/Syntrophin Alpha1 神經(jīng)肌肉接頭蛋白SNTA1抗體 0.2ml
IL-18/IGIF 白細(xì)胞介素-18/干擾素γ誘導(dǎo)因子抗體 0.1ml
Goat Anti-Bovine IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的羊抗牛IgG 0.1ml
NCOA2 類固醇受體激活蛋白2抗體 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1ml
PMS/FOLH1/PMSA 前列腺特異膜抗原抗體 0.1ml
gamma tubulin(Centrosome Marker ) 微管蛋白-γ抗體 0.1ml
Phospho-Lyn (Tyr497) 磷酸化膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體 0.1ml
HBV pre S1/S2 protein 人乙肝pre S1/S2蛋白抗體 0.1ml
Rabbit Anti-Avidin/Bio 生物素標(biāo)記的兔抗親和素 0.1ml
PAK4 p21激活激酶4抗體 0.1ml
Measles virus fusion protein 麻疹融合蛋白抗體 0.2ml
SPAG5/MAP126/Astrin 相關(guān)抗原5抗體 0.1ml
微生物菌種的培養(yǎng):
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過(guò)0.5%),碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,不利于放線菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng),有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過(guò)程,因菌種不同而異,一般可分為種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱為種子,把種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過(guò)培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱為二級(jí)種子,將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理,使用三級(jí)種子的發(fā)酵,稱為四級(jí)發(fā)酵。