使用方法:

一、樣品 RNA 的制備

1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），

反應(yīng)終體積為 20μL。

4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。

訂購信息：

產(chǎn)品名稱：枝頂孢霉PCR實(shí)驗(yàn)試劑

英文名稱：Acremonium strictumPCR
貨號(hào)：BJ-01R3221

產(chǎn)品規(guī)格：50T

運(yùn)輸：低溫

保存：負(fù)20度

有效期：一年

貨期：現(xiàn)貨

【儲(chǔ)存條件及有效期】:

-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個(gè)月。

【適用儀器】:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。

【樣本采集、存放及運(yùn)輸】：

u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；

u 運(yùn)輸：采用**或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

本公司產(chǎn)品僅用于科研。

【自備試劑】:

核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制:

1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括量和相對(duì)定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對(duì)原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

Fmoc-Val-Cit-PAB-MMAE  5μg  (+)-PD 128907 hydrochloride  1mg  Ac-Leu-Arg-AMC  50μg

Wnt-C59  10mg  APP-FUBINACA  25μg  Pparδ agonist 2  25g

FR 58664  10mg  CSNK2A1 Human  1mg  α-Defensin 6  1mg

N-Hydroxysulfosuccinimide (sodium salt)  500μg  Tirzepatide hydrochloride  2mg  7-Aminoclonazolam  25mg

H-Tyr(3-Cl)-OH  1g  IL 6 Human, His  50mg  Brofaromine (CGP 11305A)  50mg

BATF Human  1g  NIPSNAP1 Human  5mg  Sodium Oxamate  1mg

LLO  5mg  Pimelic Diphenylamide 106 analog (RGFA-8 analog)  50mg  GSK-J1 lithium salt  1mg

VH 032 amide-alkylC5-amine  5g  POP4 Human  25g  Naphthofluorescein  10μg

BI-7273  1mg  Hexanoic Acid-d11  10mg  6-FAM (6-Carboxyfluorescein)  25g

Zebularine  20μg  Manidipine 2HCl  50mg  4-Nitrophenyl Butyrate  1g

BAIAP2 Human  5μg  CMV Pp52  500μg  Histrelin (acetate)  100mg

BMY-25271  5mg  4-hydroperoxy 2-Nonenal  2μg  Karenitecin (Cositecan)  1mg

MBP146-78  250mg  Acetyl Angiotensinogen (1-14), porcine  1mg  Pregnenolone sulfate (sodium salt)  1g

Influenza-A H1N1 New Caledonia  100mg  Nimbin  1g  Bradykinin 2-9 (Des-Arg1-bradykinin)  5mg

Retinol (Vitamin A1)  1mg  Dimenhydrinate  5mg  Sograzepide (Netazepide)  5mg

枝頂孢霉PCR實(shí)驗(yàn)試劑落新婦苷 英文名稱Astilbin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 SPTLC1  絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1抗體 0.2ml

蘆丁 英文名稱Rutin 含量：UV≥98% 20mg/支 SLC27A5  脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體 0.2ml

雷公藤甲素 英文名稱Triptolide 含量：HPLC≥98% 20mg/支 Clathrin heavy chain/Clathrin HC  網(wǎng)格蛋白重鏈抗體 0.2ml

雷公藤乙素 英文名稱Tripdiolide 含量：HPLC≥98% 20mg/支 RAB-14  RAS相關(guān)蛋白癌基因Rab14抗體 0.2ml

雷公藤紅素 英文名稱Celastrol 含量：HPLC≥98% 20mg/支 ARHG7  p21活化蛋白激酶ARHG7抗體 0.2ml

雷公藤內(nèi)酯甲 英文名稱 wilforlide A 含量：HPLC≥98% 20mg/支 TdT/DNTT  末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml

木犀草素 英文名稱Luteolin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 phospho-c-Abl(Thr754)  磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體 0.1ml

木犀草苷 英文名稱Cynaroside 含量：HPLC≥98% 20mg/支 FUCA1/Alpha L fucosidase I  α-L巖藻糖苷酶抗體 0.2ml

沒食子酸 英文名稱Gallic acid 含量：HPLC≥98% 20mg/支 TNFR1/TNF Receptor I  腫瘤壞死因子受體1抗體 0.1ml