訂購信息：

產(chǎn)品名稱：白樂杰馬杜拉放線菌PCR實驗試劑

英文名稱：Actinomadura pelletieriPCR
貨號：BJ-01R3225

產(chǎn)品規(guī)格：50T

運輸：低溫

保存：負20度

有效期：一年

貨期：現(xiàn)貨

【儲存條件及有效期】:

-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。

【適用儀器】:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。

【樣本采集、存放及運輸】：

u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；

u 運輸：采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。

本公司產(chǎn)品僅用于科研。

【自備試劑】:

核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制:

1、 酶標板：一塊（96孔）

2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

使用方法:

一、樣品 RNA 的制備

1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），

反應(yīng)終體積為 20μL。

4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。

實驗注意事項：

1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括量和相對定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

CY3-YNE  5mg  Phalloidin-Fluorescein Conjugate  100μg  Indanomycin  10mM*1mLinDMSO

YWHAE Human  25g  Iloprost  1mg  PLX51107  10mg

HCV Genotype 1b, 170 a.a.  10mg  H-D-Tyr(tBu)-OH  25mg  Golotimod hydrochloride  50mg

T4 DNA  5g  SNCG Human  1mg  Celiprolol (hydrochloride)  50mg

ALDH5A1 Human  250mg  Z-Gly-Pro-AMC  5mg  Avermectin B1a aglycone  50μg

REN Human, sf9  25mg  JWH 370  5mg  3-(Benzylthio)-Propionic acid  10mM(in1mLDMSO)

E3330  1mg  Luteinizing Hormone Releasing Hormone (LH-RH), salmon  5mg  Levophacetoperane hydrochloride  50mg

IL31 Canine  25μg  NG25  1mg  JWH 022  25mg

Neogambogic acid  10mg  BATF Human  10μg  Fura-FF (potassium salt)  250mg

LY171883  5g  2-Methylpentanedioic acid  5μg  KN-92  1g

pTH (13-34) (human)  25mg  Crystal Violet  5mg  JNJ-47117096 hydrochloride (MELK-T1 hydrochloride)  10mg

Alizarin  5g  Thymoquinone  50mg  PAPA NONOate  5mg

Dimetridazole-d3  1mg  1-(2,5-Dimethoxybenzyl)piperazine (hydrochloride)  250mg  Mca-PL  10mM(in1mLDMSO)

PNU 37883 hydrochloride  25mg  Flubendazole  25mg  Chlorquinaldol  1mg

Ac-CoA Synthase Inhibitor1  1mg  13-cis-N-[4-(Ethoxycarbonyl)phenyl]retinamide (Ethyl 4-((2Z,4E,6E,8E)-3,7-dimethyl-9-(2,6,6-trimethylcyclohex-1-en-1-yl)nona-2,4,6,8-tetraenamido)benzoate)  100mg  2-Pyridylamide oxime  10μg

白樂杰馬杜拉放線菌PCR實驗試劑熊果苷 英文名稱Arbutin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 HES1  轉(zhuǎn)錄因子HES-1抗體 0.2ml

辛弗林 英文名稱Synephrine 含量：HPLC≥98% 20mg/支 Factor VIII  第八因子抗體 0.1ml

香豆素 英文名稱Coumarin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 Noggin  指(趾)關(guān)節(jié)粘連NOG蛋白抗體 0.2ml

對香豆酸 英文名稱p-Coumaric acid 含量：HPLC≥98% 20mg/支 GGT1/CD224  γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶抗體 0.1ml

延胡索乙素 英文名稱Tetrahydropalmatine 含量：滴定法≥98% 20mg/支 TAGL2/TAGLN2  細胞骨架相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml

淫羊藿苷 英文名稱Icariin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 Peroxiredoxin 2/PRXII  硫氧還蛋白過氧化物酶Ⅱ/巰基抗氧化蛋白抗體 0.1ml

柚皮苷 英文名稱Naringin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 IL-8/CXCL8  白介素8抗體 0.1ml

柚皮素 英文名稱Naringenin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 VIP Receptor 1/VAPC1  血管活性腸肽受體-1抗體 0.1ml

原花青素 英文名稱Proanthocyanidins 含量：UV≥95% 20mg/支 Desmocollin 2  橋粒糖蛋白2/橋粒糖蛋白3抗體 0.1ml

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在學(xué)中zui小檢出率為3個。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。