使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
訂購(gòu)信息：
產(chǎn)品名稱：牛赤羽病病毒PCR實(shí)驗(yàn)試劑
英文名稱：Akabane Disease Virus(ADV)RTPCR
貨號(hào)：BJ-01R3245
產(chǎn)品規(guī)格：50T
運(yùn)輸：低溫
保存：負(fù)20度
有效期：一年
貨期：現(xiàn)貨
【儲(chǔ)存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個(gè)月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運(yùn)輸】：
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h，-70℃以下可長(zhǎng)期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
u 運(yùn)輸：采用**或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
Kaempferol 3-O-gentiobioside 10mM*1mLinDMSO ARN14686 5mg GRK2-IN-1 hydrochloride 50mg
Z-Gly-Ala-Gln-AMC 5mg Asciminib (ABL001) 20mg ESI-09 1mg
MTSES 20mg GSK2578999A 50mg Ramipril-d5 100μg
Boc-D-Threoninol(Bzl) 5g GSK682753A 50mg HDL Human 5μg
8,11,14-Eicosatriynoic Acid 1mg E260 500mg LIFR Human 50mg
NCGC00247743 1μg N-Me-Leu-OH 100μg PTTG1 Human 5mg
H-Leu-Val-OH 10mg GDC-0575 (ARRY-575, RG7741) 20μg Fmoc-Lys(Me,Boc)-OH 100mg
KN-62 1mg N-α-Benzoyl-L-Arginine ethyl ester (hydrochloride) 11g [D-Trp7,9,10]-Substance P 10mg
Quinupristin (mesylate) 200mg sCD23 Human 5mg Sodium Houttuyfonate 5mg
DMAP 10mg Ara h 1.0101 500μg N-Me-Lys-OH 1g
4-acetoxy DPT (acetate) 50mg H-Ser(Bzl)-OMe.HCl 5mg H-D-Glu(OtBu)-NH??· HCl 1mg
CAY10410 1g ANAPC13 Human 10mg D-myo-Inositol-1,3,4,5,6-pentaphosphate (sodium salt) 100μg
N-Boc-4-pentyne-1-amine 1g Riboflavin 5’-monophosphate (sodium salt hydrate) 5mg SCH 202676 hydrobromide 10μg
Atropine methyl bromide 1mg BNIP1 Human 5mg Y16 5mg
Z-Gly-Gly-NH2 10μg Fmoc-D-Val-OPfp 1mg Anantin (linear sequence) 50μg
牛赤羽病病毒PCR實(shí)驗(yàn)試劑野百合堿 英文名稱Crotaline 含量：HPLC≥95% 20mg/支 CA153/EMA/Mucin-1 subunit alpha 乳腺癌相關(guān)抗原抗體 0.1ml
葒草苷 英文名稱Orientin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 GRM2/GLUR2 促代謝型谷氨酸受體2抗體 0.1ml
異葒草苷 英文名稱Homoori entin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 CD133 造血干細(xì)胞抗原CD133抗體 0.1ml
紫云英苷 英文名稱astragalin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 Mucin 4/Muc4 粘蛋白-4抗體 0.1ml
對(duì)葉百部堿 英文名稱tuberostemonine 含量：HPLC≥98% 20mg/支 BKCA alpha 鈣激活鉀通道蛋白α抗體 0.2ml
仙茅苷 英文名稱Curculigoside 含量：HPLC≥98% 20mg/支 HSPB2 熱休克蛋白B2抗體 0.1ml
(R型)人參皂苷Rh2 英文名稱Ginsenoside Rh2 含量：HPLC≥98% 20mg/支 phospho-CD19(Ser227) 磷酸化CD19抗體 0.1ml
白花前胡甲素 英文名稱(-)-pareruptorin A 含量：HPLC≥98% 20mg/支 CD8 CD8抗體 0.1ml
白花前胡丙素 英文名稱(+)-pareruptorin A 含量：HPLC≥98% 20mg/支 CD8 alpha CD8抗體 0.1ml