訂購信息：

產品名稱：自養(yǎng)無枝酸菌熒光-PCR法

英文名稱：Amycolata autotrophicaPCR
貨號：BJ-01R3255

產品規(guī)格：50T

運輸：低溫

保存：負20度

有效期：一年

貨期：現(xiàn)貨

【儲存條件及有效期】:

-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。

【適用儀器】:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。

【樣本采集、存放及運輸】：

u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（多凍融3次）；

u 運輸：采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。

本公司產品僅用于科研。

【自備試劑】:

核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產品。

組成及試劑配制:

1、 酶標板：一塊（96孔）

2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

使用方法:

一、樣品 RNA 的制備

1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

二：RT（逆轉錄）反應合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反應體系（20 μL 體系）

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），

反應終體積為 20μL。

4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。

實驗注意事項：

1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括量和相對定量）和定性分析。

主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

Fmoc-Ile-Pro-OH  5mg  SPP1 Human, HEK  20μg  E3 Ligase Ligand-Linker Conjugates 24 TFA (E3 Ligase Ligand-Linker Conjugates 24 trifluoroacetate)  10mg

Tyr-CRF (human, rat)  25mg  Ketoprofen  10mg  NMNAT1 Human  50mg

THAP1 Human  50mg  D-arabinose  25g  (1R,3S)-3-Aminocyclopentane carboxylic acid  1mg

SARS Antibody  10mg  Danoprevir (RG7227)  5mg  Dehydroergosterol  50mg

DS16570511  5mg  AMN Human  50mg  NAV-2729  1mg

GGCT Human  5mg  Methyl gallate (Gallincin)  ?1mg  IFNG Canine  1mg

Influenza-B Qingdao  25g  TTA-Q6  100mg  Indirubin  10μg

CFI-400945 fumarate  1mg  Coenzyme A  5mg  QM385  1mg

Z-VAD-AMC (acetate)  20μg  Carbamoyl-DL-Ala-OH  10mg  GSK4028  50mg

ENMD-2076  1mg  IP 10 Rhesus macaque  100μg  C 75  10mg

Dehydronitrosonisoldipine  500mg  9-deoxy-9-methylene-16,16-dimethyl Prostaglandin E2  5μg  Tomatine  50mg

1,2,3-Trinervonoyl-rac-glycerol  1mg  Guanidinoethyl sulfonate  5mg  NIBR189  100g

AG 1295  1g  Phentolamine Analogue 1  25μg  SH-4-54  5mg

Z-D-Pro-OH  5mg  H-Gly-Ala-OH  200mg  S-(+)-Marmesin ((+)-Marmesin)  5mg

Meconin  5mg  Talmapimod (SCIO-469)  100mg  Sephin1  1g

自養(yǎng)無枝酸菌熒光-PCR法地膚子皂苷Ic 英文名稱Momordin Ic 含量：HPLC≥98% 20mg/支 ELAVL3/HuC  副腫瘤綜合癥小腦變性相關蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

大薊苷（柳穿魚葉苷） 英文名稱Pectolinarin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 Adiponectin  脂聯(lián)素抗體規(guī)格: 0.1ml

2”-O-沒食子?；鸾z桃苷 英文名稱2"-O-galloylhyperin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 APH1a  早老素γ分泌酶抗體規(guī)格: 0.2ml

9-甲氧基喜樹堿 英文名稱9-methoxycamptothecine 含量：HPLC≥98% 20mg/支 Acrosin  精子頂體前體蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

鹽酸石蒜堿 英文名稱Lycorine chloride 含量：HPLC≥98% 20mg/支 SNX25  分揀微管連接蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

光甘草定 英文名稱Glabridin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 ADM/AM/Adrenomedullin  腎上腺髓質素抗體規(guī)格: 0.1ml

橙黃決明素 英文名稱aurantio-obtusin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 ADM (ProAM-N20)  腎上腺髓質素抗體(N端20肽)規(guī)格: 0.1ml

荷葉堿 英文名稱Nuciferine 含量：HPLC≥98% 20mg/支 ADM R  腎上腺髓質素受體抗體規(guī)格: 0.1ml

鷹嘴豆芽素A 英文名稱Biochanin A 含量：HPLC≥99% 20mg/支 C CBL  原癌基因CBL2抗體規(guī)格: 0.2ml

PCR反應的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在學中zui小檢出率為3個。

(3) 簡便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。