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產(chǎn)品名稱:甲型肝炎病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào):BJ-01R5020
產(chǎn)品規(guī)格:50T
運(yùn)輸:低溫
保存:負(fù)20度
有效期:一年
貨期:現(xiàn)貨
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,有效期6個(gè)月。
【適用儀器】
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運(yùn)輸】:
u 樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
u 存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
u 運(yùn)輸:采用或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】
核酸提取試劑,如QIAGEN QIAamp Viral
RNA Mini試劑盒,也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
使用方法
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括量和相對(duì)定量)和定性分析。產(chǎn)品僅用于科研使用
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
IL12B Protein Mouse 重組小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (His 標(biāo)簽)Indo 1-AM;鈣熒光探針質(zhì)量規(guī)格:>95%,進(jìn)口Indo 1-AM
TE671 subline No.2(人橫紋肌肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 NCI-H1755 [H1755](人肺癌細(xì)胞)Fluo 4-AM;鈣熒光探針質(zhì)量規(guī)格:>95%,進(jìn)口Fluo 4-AM
CM-M036小鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL鮭魚精DNA質(zhì)量規(guī)格:進(jìn)分,Sigma31149,蛋白小于5%DNA from salmon sperm
SELE Others Mouse 小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 5-氟脫氧胞苷質(zhì)量規(guī)格:98%,進(jìn)分5-Fluoro-2'-deoxycytidine
上皮細(xì)胞培養(yǎng)基-2EpiCM-25-氟-2‘-脫氧尿苷;氟尿苷質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR5-Fluoro-2'--deoxyuridine
VSIG4 Others Mouse 小鼠 VSIG4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鈷試劑(1-亞硝基-2-萘酚)質(zhì)量規(guī)格:AR1-Nitroso-2-Naphthol
腎系膜細(xì)胞Many types of cells包裝:5 ×105方(1ml)氯磺酚S質(zhì)量規(guī)格:顯色劑,96.0%Sulfochlorophenol S calcium salt
AGER Others Human 人 AGER / RAGE 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 1-萘酚質(zhì)量規(guī)格:AR,>99.5%1-Naphthol
大鼠前列腺上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL愈創(chuàng)木酚質(zhì)量規(guī)格:AR,液體,本地銷售Guaiacol
BRL大鼠肝細(xì)胞 Rat hepatic cells BRL DMEM+10%FBSβ-胡蘿卜素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥90%,標(biāo)準(zhǔn)品β-Carotene
甲型肝炎病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒IR983F(大鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2醋酸維生素A,英文名或英文縮寫:Vitamin A acetate,級(jí)別:IND,規(guī)格:1克
A2780(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H115人腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞(亞系);293T/17(3-錄炳基)三基硅烷,98% (3-CHLOROPROPYL)TRIMqTHYLSILcNq 344-83-4
CM-R023大鼠管內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL卵鱗脂吐溫-80營(yíng)養(yǎng)瓊脂 Lqcithin Twqqn-80 Nutriqnt cgcr
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Anhui/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) TRITONX-114曲拉通 X-114蛋白組學(xué)級(jí)4L9036-19-5RT
人羊膜上皮細(xì)胞HAmEpiC1145-80-8N-芐氧羰基-L-絲酸N-Cbz-L-Serine