操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
生化法檢測試劑盒:分光光度法、微量法、比色法、酶標法、高液相色譜法,自主**,技術(shù)**團隊,操作簡便快捷,規(guī)格合理、系列成套,價格合理,是廣大科研工作者的好選擇。
產(chǎn)品名稱 |
測定方法 |
規(guī)格 |
貨號 |
輔酶ⅡNADP(H)含量生化試劑盒50管/24樣 |
可見分光光度法 |
50管/24樣 |
BJ-0161115-50管/24樣 |
商品介紹:
測定意義
輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,NADP+和NADPH含量測定可以計算NADP(NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+比值不僅是細胞氧化還原態(tài)的主要標志之一,而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。
測定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和NADPH。NADPH通過PMS的遞氫作用,使氧化型噻唑藍(MTT)還原為甲瓚,570nm下檢測吸光值,從而測定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+為NADPH,從而檢測NADP+含量。
所需的儀器和用品
可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
儀器:
1、分光光度計/酶標儀/半自動生化分析儀(比色測定波長為550nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、臺式離心機
4、漩渦混勻器
特點:
(1)應(yīng)用廣泛
由于各種各樣的無機物和有機物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)靈敏度高
由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機顯色劑的合成和研究取得可喜的進展,從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準確度一致公認是比較高的。不但在實際工作中光度法被廣泛采用,在標準參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標準方法。
(3)選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當?shù)娘@色條件就可直接進行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。
(4)準確度高
對于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾。
(5)適用濃度范圍廣
可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。
(6)分析成本低、操作簡便、快速
MK2-IN-1 hydrochloride MAPKAPK2(MK2)激酶抑制劑 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
BCIP/NBT Alkaline Phosphatase (AP) Substrate Kit For IHC BCIP/NBT顯色試劑盒藍紫色(IHC) 1kit
Poloxime Poloxime 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|500mg|1g
Rebaudioside A α-glucosidase抑制劑(Rebaudioside A) 1mL(10mM)|100mg|500mg
Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素鹽酸鹽 25mg
BMS-983970 Notch抑制劑(BMS-983970) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
TAPI-2 MMP/TACE和ADAM抑制劑(TAPI-2) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg
AS 602801 JNK抑制劑(AS 602801) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
甲酸脫鈣液 500ml
Dapagliflozin ((2S)-1,2-propanediol, hydrate) SGLT2抑制劑(BMS-512148) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
Troglitazone PPARγ激動劑 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
Streptavidin Alkaline Phosphatase Immunohistochemistry Kit (Mouse) SAP法**組織化學(xué)試劑盒(小鼠) 100次|500次|1000次
硼酸-硼砂緩沖液(pH7.4-9.0) 500ml
L-Tyrosine 檸檬酸合成酶抑制劑(L-Tyrosine) 1mL(10mM)|200mg|500mg
輔酶ⅡNADP(H)含量生化試劑盒50管/24樣人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 Lane Marker Loading Buffer(5x)/蛋白示蹤上樣緩沖液(非還原,5x)5ml5mlgersion
人骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 KB/鼻咽癌細胞株國產(chǎn)gersion
人熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 K562全細胞裂解液100μg100μggersion
兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 K562/慢性髓性白血病細胞株國產(chǎn)gersion
小鼠顆粒酶B(Gzms-B)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 Jurkat全細胞裂解液100μg國產(chǎn)gersion
豬載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 Jurkat/人外周血白血病T細胞株國產(chǎn)gersion
大鼠維生素D3(VD3)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 Inclusion body Denature Reagent/包涵體蛋白溶解液100ml國產(chǎn)gersion
人Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 Improved-Lowry蛋白定量試劑盒500次國產(chǎn)gersion
人堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 Improved-Hematoxylin/改良型蘇木素(IHC常用復(fù)染試劑)10ml國產(chǎn)gersion
小鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 HT-29全細胞裂解液100ug100uggersion
人微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 IEC-6/大鼠小腸上皮細胞株國產(chǎn)gersion