生化法檢測試劑盒:分光光度法、微量法、比色法、酶標法、高液相色譜法,自主研發(fā),技術(shù)研發(fā)團隊,操作簡便快捷,規(guī)格合理、系列成套,價格合理,是廣大科研工作者的好選擇。
產(chǎn)品名稱 |
測定方法 |
規(guī)格 |
貨號 |
線粒體活性氧產(chǎn)生速率(ROS)生化試劑盒(熒光法) |
熒光法 |
100管/96樣 |
BJ-0161151-100管/96樣 |
商品介紹:
測定意義:
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等,研究表明,機體95%以上的活性氧(ROS)都來自于線粒體,其失衡所致的氧化應(yīng)激與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關(guān)。
正常情況下,細胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài),細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平維持在較低的生理范圍;在病理情況下,細胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破,細胞內(nèi)活性氧水平過多,就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸,使機體出現(xiàn)氧化應(yīng)激,同時,活性氧還可攻擊線粒體DNA產(chǎn)生氧化損傷,導致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結(jié)構(gòu)和功能變化。
因此,通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。
測定原理:
熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜,在線粒體內(nèi)被酯酶水解,形成無熒光的DCFH,DCFH迅速與ROS反應(yīng)生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根據(jù)上述原理設(shè)計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產(chǎn)生速率的方法。將熒光強度隨時間變化的數(shù)據(jù)點擬合,線性回歸直線斜率與ROS產(chǎn)生的速率呈正比。
需自備的儀器和用品:
多功能酶標儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水。
儀器:
1、分光光度計/酶標儀/半自動生化分析儀(比色測定波長為550nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、臺式離心機
4、漩渦混勻器
特點:
(1)應(yīng)用廣泛
由于各種各樣的無機物和有機物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)靈敏度高
由于相應(yīng)學科的發(fā)展,使新的有機顯色劑的合成和研究取得可喜的進展,從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準確度一致公認是比較高的。不但在實際工作中光度法被廣泛采用,在標準參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標準方法。
(3)選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當?shù)娘@色條件就可直接進行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。
(4)準確度高
對于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾。
(5)適用濃度范圍廣
可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。
(6)分析成本低、操作簡便、快速
操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
BDP5290 ROCK和MRCK抑制劑(BDP5290) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
Wortmannin PI3K和MLCK活性抑制劑(Wortmannin) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg
GSK 650394 SGK抑制劑(GSK 650394) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
LLY-507 SMYD2抑制劑(LLY-507) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg
Luxol Fast Blue染色液 50ml
Edoxaban tosylate monohydrate FXa抑制劑(Edoxaban tosylate monohydrate) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒(紫外分光光度法) 25管/24樣
Mogrol ERK1/2和STAT3信號通路抑制劑(Mogrol) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg
GSK137647A FFA4激動劑(GSK137647A) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
GNE-7915 LRRK2抑制劑(GNE-7915) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg
NBD-557 HIV-1抑制劑(NBD-557) 1mL(10mM)|5mg|10mg
Simvastatin HMG-CoA reductase抑制劑 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
Lomeguatrib MGMT抑制劑(Lomeguatrib) 1mL(10mM)|10mg|50mg
UMI-77 Mcl-1SMI抑制劑(UMI-77) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
線粒體活性氧產(chǎn)生速率(ROS)生化試劑盒(熒光法)大鼠嗜酸細胞陽離子蛋白(ECP)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒 環(huán)腺苷二磷酸核糖水解酶(cADPRH)重組蛋白Recombinant Cyclic ADP Ribose Hydrolase (cADPRH)
人C4結(jié)合蛋白(C4BP)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 環(huán)氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白Recombinant Epoxide Hydrolase 4 (EPHX4)
人膠原吡啶交聯(lián)(PYD)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 回腸脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP6)重組蛋白Recombinant Fatty Acid Binding Protein 6, Ileal (FABP6)
人維生素E(VE)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 饑餓素-O-乙?;D(zhuǎn)移酶(GOAT)重組蛋白Recombinant Ghrelin-O-Acyltransferase (GOAT)
小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 肌紅蛋白(MYO)重組蛋白Recombinant Myoglobin (MYO)
人CCAAT增強子結(jié)合蛋白δ(C/EBPδ)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 肌肌酸激酶(CKM)重組蛋白Recombinant Creatine Kinase, Muscle (CKM)
人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 肌球蛋白輕鏈1(MYL1)重組蛋白Recombinant Myosin Light Chain 1, Alkali, Fast Skeletal (MYL1)
人生長**釋放因子(GH-RF)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 肌球蛋白輕鏈2(MYL2)重組蛋白Recombinant Myosin Light Chain 2, Regulatory, Cardiac (MYL2)
兔子白介素10(IL-10)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 肌球蛋白輕鏈激酶(MYLK)重組蛋白Recombinant Myosin Light Chain Kinase (MYLK)
大鼠N-乙?;?/span>-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 肌球蛋白重鏈2(MYH2)重組蛋白Recombinant Myosin Heavy Chain 2, Skeletal Muscle, Adult (MYH2)
小鼠葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 肌球蛋白重鏈1(MYH1)重組蛋白Recombinant Myosin Heavy Chain 1, Skeletal Muscle, Adult (MYH1)