操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
生化法檢測試劑盒:分光光度法、微量法、比色法、酶標(biāo)法、高液相色譜法,自主**,技術(shù)**團(tuán)隊(duì),操作簡便快捷,規(guī)格合理、系列成套,價(jià)格合理,是廣大科研工作者的好選擇。
產(chǎn)品名稱 |
測定方法 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶生化試劑盒25管/24樣 |
紫外分光光度法 |
25管/24樣 |
BJ-01611131-25管/24樣 |
商品介紹:
測定意義:復(fù)合體Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是線粒體內(nèi)膜中*大的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對電子從NADH傳遞給CoQ,同時(shí)可使O2還原**O2.-,是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位。測定該酶活性,不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈(ETC)狀態(tài),而且可以反映活性氧(ROS)**狀態(tài)。測定原理:復(fù)合體Ⅰ能夠催化NADH脫氫**NAD+,在340nm下測定NADH的氧化速率計(jì)算出該酶活性的大小。需自備的儀器和用品:紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
儀器:
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀(比色測定波長為550nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、臺(tái)式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
特點(diǎn):
(1)應(yīng)用廣泛
由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)靈敏度高
由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致公認(rèn)是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。
(3)選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。
(4)準(zhǔn)確度高
對于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾。
(5)適用濃度范圍廣
可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。
(6)分析成本低、操作簡便、快速
DAB Immunohistochemistry Color Development Kit DAB**組織化學(xué)顯色試劑盒 100次|500次|1000次
QNZ NF-κB活化抑制劑(QNZ) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
總糖含量測試盒(微量法) 100管/96樣
PTP1B-IN-2 PTP1B抑制劑(PTP1B-IN-2) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg
VX-11e ERK抑制劑(VX-11e) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
GSK2334470 PDK1抑制劑(GSK2334470) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
細(xì)胞色素氧化酶染色液(對苯二銨法) 4×50ml
植物丙二醛(MDA)檢測試劑盒(TBA比色法) 50T|100T
氧化型/脫氫抗壞血酸(DHA)含量測試盒(微量法) 100管/96樣
糖原磷酸化酶b(GPb)測試盒(微量法) 100管/48樣
紅色標(biāo)本保色液Ⅰ 500ml
β-半乳糖苷酶(β-GAL)測試盒(微量法) 100管/48樣
Peficitinib JAK抑制劑(Peficitinib) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
SZL P1-41 Skp2抑制劑(SZL P1-41) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶生化試劑盒25管/24樣豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白Ⅱ(IGFBP-Ⅱ)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒 回盲腸癌細(xì)胞英文名稱:HCT-8
大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 肌肉組織來源細(xì)胞英文名稱:HMF
人8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 急性T**細(xì)胞白血病細(xì)胞英文名稱:JM
人活化蛋白C(APC) ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 急性混合型白血病細(xì)胞英文名稱:HAL-01
人神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 急性**母細(xì)胞白血病細(xì)胞英文名稱:MT-4
兔載脂蛋白E(Apo-E)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 急性**母細(xì)胞白血病細(xì)胞英文名稱:MOLT-4
小鼠腦啡肽(ENK)ELISA試劑盒96T試劑盒 甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL
大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒 甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL
大鼠血管**素2(ANG-2)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 間充質(zhì)干細(xì)胞-肝
人間變性**瘤激酶(ALK)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪
人NOD樣受體-1(NOD-1)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒 間充質(zhì)干細(xì)胞-臍帶