操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
生化法檢測試劑盒:分光光度法、微量法、比色法、酶標(biāo)法、高液相色譜法,自主**,技術(shù)**團(tuán)隊(duì),操作簡便快捷,規(guī)格合理、系列成套,價(jià)格合理,是廣大科研工作者的好選擇。
產(chǎn)品名稱 |
測定方法 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)生化試劑盒50管/48樣 |
紫外分光光度法 |
50管/48樣 |
BJ-01611162-50管/48樣 |
商品介紹:
測定意義PEPC(EC 4.1.1.31)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是催化磷酸烯醇式丙酮酸與二氧化碳反應(yīng)**草酰乙酸呈不可逆反應(yīng)的酶,對(duì)三羧酸循環(huán)的運(yùn)轉(zhuǎn)起重要調(diào)節(jié)作用。測定原理PEPC催化磷酸烯醇式丙酮酸和CO2**草酰乙酸和HPO42-,蘋果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH**蘋果酸和NAD+,在340nm測定NADH減少速率,計(jì)算PEPC活性。需自備的儀器和用品紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
儀器:
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀(比色測定波長為550nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、臺(tái)式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
特點(diǎn):
(1)應(yīng)用廣泛
由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)靈敏度高
由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對(duì)元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對(duì)于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致公認(rèn)是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。
(3)選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。
(4)準(zhǔn)確度高
對(duì)于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對(duì)誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾。
(5)適用濃度范圍廣
可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。
(6)分析成本低、操作簡便、快速
Aspartate aminotransferase Assay Kit 谷草轉(zhuǎn)氨酶測試盒(微板法) 96T
Rhodamine (TRITC)-conjugated Streptavidin TRITC標(biāo)記鏈霉親和素 10μl
BCA蛋白濃度測定試劑盒 250次/500次/2500次
IRAK inhibitor 2 IRAK-4抑制劑(IRAK inhibitor 2) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
Varespladib sPLA抑制劑(Varespladib) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
伊紅染色液(醇溶,0.5%) 100ml|500ml
JK184 Hedgehog(Hh)抑制劑(JK184) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
AV-412 free base EGFR抑制劑(AV-412 free base) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
Fasudil Hydrochloride ROCK-II/PKA/PKG/PKC/MLCK抑制劑 1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg
PIK-75 p110α抑制劑(PIK-75) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
總脂酶測試盒(脂蛋白脂酶LPL和肝脂酶HL測試盒) 48T
醇脫氫酶(ADH)測試盒(紫外分光光度法) 50管/48樣
SMER28 SMER28 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg
PBS-T(含有0.05%Tween-20)緩沖系統(tǒng)封閉液 500ml
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)生化試劑盒50管/48樣人熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 CRFK(貓腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
兔鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 CT26.WT(小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
小鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 Daudi(**瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
鵝促黃體**(LH)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 DH82(犬巨噬細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 DLD-1(結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1 Ab IgA)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 DU 145(前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 EAC(小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
人血管緊張素Ⅱ受體1抗體(ATⅡR1)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 Eca-109(食管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
小鼠丙酮酸激酶(PK)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 EL4(小鼠**瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
大鼠**細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 WB-F344(大鼠肝上皮樣干細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
植物鈣調(diào)素(CAM)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 ES-2(卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2