操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
生化法檢測試劑盒:分光光度法、微量法、比色法、酶標法、高液相色譜法,自主**,技術(shù)**團隊,操作簡便快捷,規(guī)格合理、系列成套,價格合理,是廣大科研工作者的好選擇。
產(chǎn)品名稱 |
測定方法 |
規(guī)格 |
貨號 |
淀粉磷酸化酶(SP)生化試劑盒(微量法) |
微量法 |
100管/96樣 |
BJ-01611213-100管/96樣 |
商品介紹:
測定意義:
淀粉磷酸化酶(Starch Phosphorylase,SP)是淀粉代謝過程**的可逆反應(yīng)酶,既可催化淀粉的合成,也可催化淀粉的分解。
在高等植物中,淀粉磷酸化酶(合成方向)主要存在于質(zhì)體中,負責延長淀粉的 α-1,4-葡萄糖鏈的非還原末端;淀粉磷酸化酶(分解方向)主要存在于細胞質(zhì)基質(zhì)中,催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵磷酸解產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸,負責葡萄糖鏈的磷酸解,是淀粉代謝過程中的關(guān)鍵酶。
在植物體中,淀粉磷酸化酶分解方向的底物無機磷濃度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸濃度幾乎高了兩個數(shù)量級,一般認為淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解,因此,分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要測定意義。
測定原理:
淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵與無機磷反應(yīng)產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸,葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖變位酶的作用下產(chǎn)生葡萄糖-6-磷酸,并在6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化下還原NADP+產(chǎn)生NADPH,使340nm下吸光值增加。
需自備的儀器和用品:
酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
儀器:
1、分光光度計/酶標儀/半自動生化分析儀(比色測定波長為550nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、臺式離心機
4、漩渦混勻器
特點:
(1)應(yīng)用廣泛
由于各種各樣的無機物和有機物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)靈敏度高
由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機顯色劑的合成和研究取得可喜的進展,從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準確度一致公認是比較高的。不但在實際工作中光度法被廣泛采用,在標準參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標準方法。
(3)選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當?shù)娘@色條件就可直接進行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。
(4)準確度高
對于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾。
(5)適用濃度范圍廣
可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。
(6)分析成本低、操作簡便、快速
Dolutegravir sodium HIV蛋白酶抑制劑(Dolutegravir sodium) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
Hederagenin iNOS/COX-2和NF-κB抑制劑(Hederagenin) 1mL(10mM)|5mg|10mg
PSI-7976 HCV RNA復(fù)制抑制劑(PSI-7976) 1mL(10mM)|1mg|5mg
AICAR AMP活化蛋白激酶激活劑(AMPK激活劑) 1mL(10mM)|50mg|100mg|200mg|500mg
IWR-1 Wnt抑制劑(IWR-1) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
TG 100801 多靶點激酶抑制劑(TG 100801) 1mL(10mM)|5mg|10mg
原果膠含量測試盒(可見分光光度法) 50管/24樣
Etomidate GABAA受體激動劑(Etomidate) 1mL(10mM)|100mg|500mg
Zetterqvist Fixative Solution Zetterqvist固定液 250mL
PF-915275 11βHSD1抑制劑(PF-915275) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
APD668 GPR119激動劑(APD668) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
Telbivudine HBV復(fù)制抑制劑(Telbivudine) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
ETP-46321 PI3K α/δ抑制劑(ETP-46321) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
mTOR-IN-1 mTOR抑制劑(mTOR-IN-1) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
淀粉磷酸化酶(SP)生化試劑盒(微量法)小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒 kasumi-1, 白血病細胞株
大鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒
雞卵黃高磷蛋白磷酸肽(PPP)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒
人超敏生長**(U S-GH)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒
人空腸彎曲菌黏附蛋白(PEB1)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒
人煙酰胺腺嘌呤核苷酸磷酸(NADPH)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒
小鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒
鴨抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒
大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒
人蛋白激酶C(PKC)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒
綿羊生長**(GH)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒