原代細(xì)胞實驗步驟：
以胚胎小鼠為例
1．取材：將孕鼠拉頸椎處死，投入75%酒精浸泡數(shù)秒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蠟盤中用大頭針固定。用手術(shù)器械逐層分離皮膚和肌肉組織，打開腹腔。注意不同的解剖層次使用不同的器械。后取出雙角置于無菌平皿內(nèi)。
2．用Hanks液洗滌3次，剪開取出胚胎。血液和筋膜等組織。
3．用彎頭剪把胚胎盡量剪碎，每個組織塊小于1mm3。在操作時應(yīng)盡量將平皿蓋半蓋住平皿以防空氣中塵埃落下污染組織。再用Hanks液洗滌2~3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按兩種方法進(jìn)行，即消化法和組織塊培養(yǎng)法。
4．若使用消化法，則將組織塊放人三角燒瓶內(nèi)加入10~30mL0.125%胰蛋白酶，37℃磁力攪拌消化20多min。然后加入少量血清終止消化。用幾層無菌紗布過濾。取過濾液，800r/min離心5~10min收集細(xì)胞。棄上清，加入帶有雙抗的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
注：細(xì)胞分離的方法各實驗室不同，所采用的消化酶也不相同（如膠原酶，透明質(zhì)酶等）。
5．若進(jìn)行組織塊培養(yǎng)，則不做步驟4，加入幾滴血清于組織塊中，再用彎頭吸管將組織塊懸液吸起。在一小培養(yǎng)瓶中逐個鋪展開，注意將瓶底涂抹均勻。將瓶子翻轉(zhuǎn)倒置后在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)放置2－3h。待組織塊微干與瓶壁粘牢后再輕輕將瓶子翻轉(zhuǎn)過來，從邊角加入4~5mL培養(yǎng)基，使細(xì)胞接觸到培養(yǎng)基，放培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。
本產(chǎn)品于科學(xué)研究實驗使用、不得用于其它。
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產(chǎn)品貨號 |
P-X1579 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
5×105 |
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組織來源 |
腸組織 |
生長特性 |
貼壁 |
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細(xì)胞形態(tài) |
內(nèi)皮細(xì)胞樣 |
產(chǎn)品類別 |
大鼠原代細(xì)胞 |
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傳代特性 |
可傳2-3代 |
用途 |
僅供科研 |
細(xì)胞簡介：
大鼠腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至的消化管。腸是消化管中長的一段，也是功能重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進(jìn)行的，大腸主要濃縮食物殘渣，形成糞便，再通過直腸經(jīng)排出體外。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機(jī)體內(nèi)大的微生態(tài)系統(tǒng)。微血管是極細(xì)微的血管，管徑平均為6-9μm，連于動、靜脈之間，互相連接成網(wǎng)狀。微血管壁薄，管徑較小，血流很慢，通透性大。其功能是利于血液與組織之間進(jìn)行物質(zhì)交換。其管壁主要由一層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成，在內(nèi)皮外面有一薄層結(jié)締組織。另外還?？梢姷揭环N扁而有突起的細(xì)胞貼在微血管的管壁外面，稱為周細(xì)胞。
方法簡介：
公司實驗室分離的大鼠腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的大鼠腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
相關(guān)產(chǎn)品：
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小鼠椎體終板軟骨干細(xì)胞 Primary mouse vertebral endplate chondrostem cells |
猴胎腎細(xì)胞；MARC145/Gal-10 |
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人DC細(xì)胞 Human primary DC cells |
SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞（亞系）；293T/17 |
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293A (人胚腎細(xì)胞) (STR鑒定正確) |
棕果蝠肺成纖維細(xì)胞 |
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人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞 |
人肺癌細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏） |
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豬主動脈內(nèi)皮細(xì)胞 Porcine aortic endothelial cells;pAEC |
小鼠椎體終板軟骨干細(xì)胞 Primary mouse vertebral endplate chondrostem cells |
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豬小腸上皮細(xì)胞；ZYM-DIEC02 |
猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞；RF/6A |
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PLEKHM3 |
山羊膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)elisa分析檢測試劑盒 |
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HumanAMBPELISAKit |
金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體 TIMP-4 |
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人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)elisa分析檢測試劑盒 |
減數(shù)分裂阻滯蛋白1抗體 LIMKAIN B1 |
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CD2F-10抗體 Anti-SLAMF9 |
AF680標(biāo)記的甲胎蛋白抗體 AFP, Alexa Fluor 680 conjugated |
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血小板白細(xì)胞C激酶底物源結(jié)構(gòu)域M3抗體 |
Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白1抗體 FNDC1 |
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Rabbit Anti-Monkey IgM / PE-Cy3 |
CCK-8ELISAKit |
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PE-Cy3標(biāo)記的兔抗猴IgM |
豬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)elisa分析檢測試劑盒 |
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組織因子抗體 Anti-Tissue factor/CD142/F3 |
DAO ELISA Kit |
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DNA損傷關(guān)卡蛋白1抗體 Anti-NFBD1/MDC1 |
大鼠二胺氧化酶(DAO)elisa分析檢測試劑盒 |
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環(huán)指蛋白44抗體 Anti-RNF44 |
BAXELISAKit |
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C2orf15抗體 |
組織因子（TISSUE FACTOR）活性熒光定量檢測試劑盒 |
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MUC20 |
內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)elisa分析檢測試劑盒 |
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粘蛋白20抗體 |
C2orf15 |
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尼氏染色試劑盒(甲基紫法)2×50ml |
eNOS ELISA Kit |
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通用型禽腦脊髓炎（Avian Encephalomyelitis；AE） |
大鼠髓過氧化物酶(MPO)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測 |
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人蛋白酶體(prosome,macropain)亞基,β型,1(PSMB1)elisa分析檢測試劑盒 |
大鼠腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞HumanPSMB1ELISAkit |
注意事項：
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要后方能丟棄。
5.客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有任何問題可聯(lián)系我們在線客服。