原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

以胚胎小鼠為例
1．取材：將孕鼠拉頸椎處死，投入75%酒精浸泡數(shù)秒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蠟盤中用大頭針固定。用手術(shù)器械逐層分離皮膚和肌肉組織，打開腹腔。注意不同的解剖層次使用不同的器械。后取出雙角置于無菌平皿內(nèi)。
2．用Hanks液洗滌3次，剪開取出胚胎。血液和筋膜等組織。
3．用彎頭剪把胚胎盡量剪碎，每個(gè)組織塊小于1mm3。在操作時(shí)應(yīng)盡量將平皿蓋半蓋住平皿以防空氣中塵埃落下污染組織。再用Hanks液洗滌2~3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按兩種方法進(jìn)行，即消化法和組織塊培養(yǎng)法。
4．若使用消化法，則將組織塊放人三角燒瓶內(nèi)加入10~30mL0.125%胰蛋白酶，37℃磁力攪拌消化20多min。然后加入少量血清終止消化。用幾層無菌紗布過濾。取過濾液，800r/min離心5~10min收集細(xì)胞。棄上清，加入帶有雙抗的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
注：細(xì)胞分離的方法各實(shí)驗(yàn)室不同，所采用的消化酶也不相同（如膠原酶，透明質(zhì)酶等）。
5．若進(jìn)行組織塊培養(yǎng)，則不做步驟4，加入幾滴血清于組織塊中，再用彎頭吸管將組織塊懸液吸起。在一小培養(yǎng)瓶中逐個(gè)鋪展開，注意將瓶底涂抹均勻。將瓶子翻轉(zhuǎn)倒置后在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)放置2－3h。待組織塊微干與瓶壁粘牢后再輕輕將瓶子翻轉(zhuǎn)過來，從邊角加入4~5mL培養(yǎng)基，使細(xì)胞接觸到培養(yǎng)基，放培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。

組織來源	肺組織	貨號(hào)	P-X1524
產(chǎn)品規(guī)格	5×105	生長特性	貼壁
產(chǎn)品類別	大鼠原代細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	成纖維細(xì)胞樣

細(xì)胞簡介：

大鼠肺成纖維細(xì)胞分離自肺組織；肺是機(jī)體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來；成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺成纖維細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持肺器官的正常形態(tài)，合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肺成纖維細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肺成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

相關(guān)產(chǎn)品：

小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 Mouse aortic endothelial cells；MAEC	草地夜蛾卵巢細(xì)胞；Sf9
人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞 Human primary scar fibroblasts	人二倍體細(xì)胞；HEL
6T-CEM (人T細(xì)胞白血病細(xì)胞) (STR鑒定正確)	轉(zhuǎn)化人肝上皮細(xì)胞
大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞	人胎盤絨膜癌細(xì)胞
豬胰腺腺泡上皮細(xì)胞	小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 Mouse aortic endothelial cells；MAEC
腫瘤細(xì)胞	小鼠雜交瘤細(xì)胞；HB JDSHCC39

TATA盒結(jié)合蛋白相關(guān)因子TAF1A抗體 TAF1A	狗微管相關(guān)蛋白tau(MAPT)elisa分析檢測試劑盒
AF750標(biāo)記的CD163抗體 CD163, Alexa Fluor 750 conjugated	A2BP1
T細(xì)胞分化蛋白MAL2抗體 MAL2	共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1抗體
紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白3抗體 SKA3	Histone H2B (di methyl K5)
細(xì)胞角蛋白19單克隆抗體 Cytokeratin 19	二甲基組蛋白H2B K5抗體
硒磷酸化物合成酶1抗體 SEPHS1	200微升1厘米光徑塑料比色皿
富含精氨酸/絲氨酸剪切因子17A抗體 SFRS17A	APC-Cy5.5標(biāo)記小鼠CD4單克隆抗體 Mouse CD4/APC-Cy5.5
HER2受體單克隆抗體 HER2 receptor	細(xì)胞PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒
載脂蛋白H抗體 APOH	賴脯胰島素抗體 Insulin Lispro
有絲分裂細(xì)胞周期蛋白MPP9抗體 MPHOSPH9	精子頂體膜相關(guān)蛋白4抗體 SPACA4
驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員24抗體 KIF24	組織氯乙?；D(zhuǎn)移酶（CAT）報(bào)告基因活性位素定量檢測試劑盒
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4增強(qiáng)因子抗體 SLC2A4RG	大鼠抗凝血酶受體(ATR)elisa檢測試劑盒
人anti-Survivinelisa檢測試劑盒	G蛋白偶聯(lián)受體65抗體 GPR65
小鼠丙糖磷酸異構(gòu)酶1(TPI1)elisa檢測試劑盒	大鼠Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)elisa分析檢測試劑盒
植物聚甲基半乳糖醛酸酶（Polymethylgalacturonase；PMG）活性比色法定量檢測試劑盒	大鼠8-異構(gòu)前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測
小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗體(snRNP/Sm)elisa檢測試劑盒	大鼠肺成纖維細(xì)胞α1微球蛋白α1- MG試劑盒 R1：40ml×1 R2：10ml×1 膠乳增強(qiáng)

注意事項(xiàng)：

1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。